【摘要】 为了提高检出灵敏度，甾体样品在分析前可先进行衍生化。

为了提高检出灵敏度，甾体样品在分析前可先进行衍生化。衍生化反应应该定量,避免甾体发生未知的或不希望的改变(例如去羟基作用等);衔生化后也不能影响被分离化合物的层析性质,例如衍生物有过多的羟基会引起层析拖尾y进行衍生化反戍样品的景应当是在实际分析水平上，例如甾体的苯踪反应样品在100~500ng 时反应条件与10~50ug 时显著不同;所选择的衍生物主要是提高分子中检出灵敏度,例如取代苯环结合到甾体上可挺高它的紫外检出灵敏度,今后可更期望提高电化学检出器的响应﹔过量试刹不应干扰检出。HPLC中样品衍生化首先是在甾体分析中得到广泛应用。为了提高甾酮的检出灵敏度,Henry等制成2,4-二硝基苯膘衍生物,可检出ng 量﹔包含羟基的甾体可制成苯甲酸酯或对硝基苯甲酸酯,可梭出1~10ng量。图9-4为羟基甾体的对-硝基苯甲酸酯的分离。

 

 

对于生材料中含量极低的甾体分析近来采用荧光检测器，只有很少数甾体化合物有天然荧光，大多数必须引入荧光标记化剂。在最好的仪器条件下荧光检出器比紫外检出器能提高灵敏度100~1000倍,因此能检出10～100pg量。下面介绍日本昭和大学药学系用荧光标记化剂方法分析皮质甾体的一个实例。

 

 

(2）样品的提取。0.25～0.5ml血浆加0.5ml水,0.1ml 2NNaOH 和10mlCH.C振摇1分钟,CH C1。层加0.01N H.SO,1ml振摇1分钟,CH,Cl。层7ml在氮气流下蒸干后即得提取物。

(3）丹酰化反应(Dansylation);CH,CL提取物加0.1ml HCI-EtOH(0.9ml浓HCl配成500ml EtOH 液)，再加10ul DNS-Hydrazine 试剂(2mg DH溶于10ml EtOH)放置30分钟(室温),氮气流下蒸干,残渣溶于,50ul CH,Cl。可直接注入HPLC柱中。

 

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