激素色谱分析-3

HPLC在甾体分析中最大的进展就是能很好分析血液，尿中的甾体成分，而其他层析方法存在一定困难。

尿中雌激素水平是妇女健康和器官状态的有价值的指示，妊娠时水平定然下降说明胎儿的不适或胎盘的机能障碍，雌激素作为避孕药使用也需要经常测定雌激素的循环水平以保证病人安全。传统的分析方法是基于Kober反应非专-的荧光和比色法,所耗时间较多。雌激素是作为硫酸盐或葡醛酸盐共辄物排泄到尿中，因此首先要水解释放出游离甾体，然后以有机洛剂提取，典型的样品制备步骤如下:

(1) 20ml尿＋ 3ml 12NHCl,沸水加热1小时,放冷。

(2) 20ml乙醚提取3次。

(3) 醚提取物用8ml饱和碳酸盐缓冲液洗一次(pH 10.5),1ml 89%NaHCO,洗一次，5ml水洗2次。

(4) 醚提取液蒸干后宿于8ml苯和8ml石油醚。

(5) 用8ml 19%NaOH提取酚性甾体,4ml再提一次。

(6) 浓盐酸中和破提取液,用20ral 乙醚提1次，10ml乙醚提2次。

(7) 用6毫升8%NaHCO。洗乙醚液1次，4ml水洗2次。

(8) 乙醚液蒸干,重新溶于1ml溶剂作 HPIC分析用。Huber[R以水:乙醇;异辛烷(229:680:91)固定液涂于硅藻土上，流动相为19:177;804比例的同样组成,在30分钟内能分离尿中主要的雌酮、雌二醇和雌三醇,并阐明了一系列层析参数。

尿中雌澈素用HPLC分析首先成功是由于(1)酚性甾体对酸较稳定,(2>它们与其他干扰成分易分开，(3)不饱和的A环有可能检出ng量,(4)妊娠后阶段〈首三月）尿中雌激素水平达到2~3pg/ml，所以50ml尿中已含有100~150ug 激素。其他有用Permaphase ETH 柱,吸附层析分祈的报道.

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