慢病毒载体技术的进一步优化

水疱性口炎病毒的糖蛋白包膜（VSVG）在很早之前就已经被证实有很好的宿主相容性，可以感染大量不同种属来源的细胞。由于VSV病毒仅仅是使用细胞表面普通的磷脂分子结构作为其识别的高亲和力受体，使得几乎所有动物来源的细胞均能成为它的宿主细胞。改换这种包膜的慢病毒转染能力得到极大地提高，滴度从之前的10⁵IU/mL左右提高到浓缩后的10^8-9TU/mL。这一改进通常也被看做是现代慢病毒载体技术的起点。

1996年，Naldini等率先将慢病毒载体运用于疾病的临床治疗，他的尝试充分地证明了慢病毒可以十分有效且稳定地转染处于不分裂状态下的细胞。这一重大技术进步随后被众多实验室广泛采用。通过将反式作用因子置于VSVG质粒上，Naldini将病毒蛋白表达所需的顺式元件和反式因子分开表达，提高慢病毒使用中的安全性。此外他敲除了病毒复制辅助基因vpu，改用CMV启动子起始病毒蛋白组份的转录，并在3'LTR端加入Poly A序列，报告基因也改用了β-半乳糖苷酶（lacZ)。生产病毒使用的宿主细胞改为整合了SV40病毒大T抗原的人胚胎肾皮质细胞系（293T细胞系），质粒转染的方法也改为磷酸钙转染法，这些改进时至今日仍然被广为沿用。通过这些改进，生产慢病毒获得的滴度能稳定地达到4×10⁵TU/mL(浓缩前)到4×10⁸TU/mL（浓缩后)。这些改进标志着第一代慢病毒载体正式走向成熟，开始被作为一种常用的转基因工具得到广泛运用。

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