【摘要】 细胞染色对样品的影响分为3类:促进线粒体代谢、无影响、抑制线粒体代谢。

上一期我们关于细胞染色,我们介绍到对样品的影响分为3类:促进线粒体代谢、无影响、抑制线粒体代谢。本期我们将继续介绍。

其中促进线粒体代谢,不一定会促进细胞增殖;抑制线粒体代谢也不一定会杀死细胞。因此单独的细胞毒性结果说明不了任何问题,只能根据结果得出一下猜想:细胞活性发生变化,有可能是细胞的代谢强度发生了变化,也有可能是细胞的数量发生了变化。具体是什么,需要进一步进行研究。

那么该怎么进一步研究呢?细胞死活染色实验是其中一个简单的确认实验,利用活死细胞染色试剂盒,可以非常清晰的观察到细胞的生存状态。那么活死细胞染色试剂盒的原理是什么呢?常用的试剂盒一般都是Calcein-AM(无荧光)和PI的组合,其中Calcein-AM中的AM基团主要增加疏水性,以便其穿过活细胞细胞膜,当其进入到细胞质后,酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内,发出强绿色荧光。只有活细胞可以将Calcein-AM水解,因此Calcein-AM作为活细胞指示剂;而PI只能穿过死细胞的细胞膜,因此作为死细胞指示剂。

细胞死活染色实验其实反映了四个方面的信息,分别是:死活细胞比例、细胞数量、活细胞形态以及死活细胞荧光强度。

 

 

作为初学者,通常只关注死活细胞比例,而忽视其他两方面的信息,因此容易产生文章开头的困惑。其实细胞毒性实验显示有细胞毒性,有可能细胞并没有凋亡,而只是代谢受到抑制,因此细胞状态不好,反映到死活染色实验中,可能表现为细胞形态发生改变,或者活细胞荧光强度发生变化;也有可能是细胞已经凋亡,并且已经从培养瓶壁上脱落,导致细胞数量减少。

从上面的解释中可以看出,细胞毒性实验和细胞死活染色实验是互为补充的,在做实验的过程中,我们不必只从死活细胞的比例这一个方面对两实验的结果进行分析,也可以尝试从其他方面进行解释。

 

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