【摘要】 荧光分析是一种基于物质光致发光的特性和强度的物质定性和定量分析方法。

荧光分析是一种基于物质光致发光的特性和强度的物质定性和定量分析方法。目前，研究生物大分子构象和属性等系统物理、化学性质和变化的研究也被广泛用作表征技术。

荧光光谱适用于固体粉末、晶体、薄膜、液体等样品的分析。根据样品选择石英池(液体样品)或固体样品架(粉末或块状样品)。

荧光分析的优点:(1)灵敏度高；(2)选择性强；(3)样品数量少，方法简单；(4)提供更多的物理参数。但也存在应用范围不够普遍、对环境敏感(干扰因素多)等问题。

 

1、定性研究

不同结构的莹光化合物具有激发光谱和发射光谱的特点。因此，荧光物质的激发光谱可以与发射光谱的形状、峰位和标准液体的光谱图进行比较，从而达到定性研究的目的。

 

2、定量分析

当浓度较低时，溶液的荧光强度与荧光物质的浓度成正比：F=Kc。其中，F为荧光强度，C为荧光物质浓度，K为比例系数。它是荧光光谱定量分析的基础。

上述关系不适合荧光物质浓度过高时，荧光物质浓度过高，其荧光强度反而下降。理由如下：

(1)内滤效应。第一，当溶液浓度过高时，溶液中杂质对入射光的吸收增加，相当于降低了激光的强度。第二，当浓度过高时，入射光被液池前方的荧光物质强烈吸收，而液池中后部的荧光物质会因入射光大大减弱而大大降低荧光强度；设备的检测窗口一般对准液池中间，导致检测到的荧光强度大大降低。

(2)相互作用。在高浓度溶液中，可以产生溶质之间的相互作用，产生荧光物质的激发态分子与其基态分子的二聚物或其他溶质分子的复合物，从而导致荧光光谱和/或荧光强度的变化。当浓度较高时，甚至会产生荧光物质的基态分子聚集体，导致荧光强度下降更严重。

(3)自淬灭。荧光物质的发射光谱与其吸收光谱重叠，可能导致发射的莹光被部分再吸收，从而降低荧光强度。当溶液浓度增加时，再吸收现象会加重。