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      高效液相色谱HPLC

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      高效液相色谱HPLC

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      仪器型号 Agilent HPLC 1260;赛默飞U3000;岛津LC-MS-2020;岛津LC-20A;HPLC WATERS e2695
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      项目简介

      HPLC是以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,实现对试样的分析。主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的分析,具体分为定性与定量。

      HPLC主要可解决如下几方面的问题:不挥发性化合物分析测定;极性化合物的分析测定;热不稳定化合物的分析测定;大分子量化合物(包括蛋白、多肽、多聚物等)的分析测定。但是,区别于液质联用(LCMS),LCMS一般可以通过对物质的碎片峰信息进行定性或定量,HPLC是通过物质出峰时间及峰面积来定性或定量。所以,目前高效液相色谱在环境领域,主要应用于有标准物质参照情况下,且待测物质纯度较高,出峰时间及峰形不受其余物质干扰的定性或定量分析。

      另外,所有色谱质谱类测试,涉及参数往往很多。我们会依据您的参考文献,结合实验室现存条件与经验,尽量使用相同或者相似的参数或配件。由于测试影响因素太多,没有办法保证测试参数或结果完全符合您的预期,请慎重考虑,谢谢!

      测试前请务必详细填写对接单,更多测试要求请咨询客户经理。

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      结果展示

      1、液相色谱图:液相色谱图显示了化合物的分离,色谱图是在某检测波长处查看的。Y轴为强度,X轴为保留时间。

      2、本测试不包含数据分析以及作图服务,仅提供测试数据!!如需数据分析,本公司数据分析部门收费提供。如需提供源文件,请务必提前说明。注意:源文件往往需要仪器配套的软件打开,由于该软件被各仪器厂商用序列号控制(仪器和软件之间一对一绑定,在别的计算机上装不了),因此对应软件我们不提供!

      3、HPLC测试,不同于icp等测试,测试条件、后续自行分析都较为复杂,请您适当积累一定的测试知识,便于您后续数据处理。

      样品要求

      HPLC样品要求:粉体样品需要提供20mg以上,液体样品需要提供0.5ml以上,在常规溶剂中溶解性较好。

      常见问题

      1. HPLC如何定量?

      答∶HPLC定量时,最常使用外标法(定量原理:峰面积或者峰高随浓度的变化而相应变化)。若使用其他定量方式,请提前沟通若使用外标法,除填写对接单外,您需要在对接单中额外补充:

      A、目标物质的标品-做外标;

      B、目标物质的浓度范围-决定外标定量范围。

      2. HPLC如何定性?

      答∶HPLC定性时,是以保留时间定性。此步骤也需要您提供标准品,通过比对标准品与待测物质的保留时间来定性。如果您样品成分复杂,存在待测物质的出峰情况受样品中其他物质的干扰的可能性,就算保留时间能与标准品对应上,但不能确认样品中含有该标准品物质。所以HPLC用于定性时目标物质纯度应该较高。

      3. 目标物质含量较低,可能测不出怎么办?

      可以进行浓缩的预处理,因为一般天然样往往含量较低,低于检出限,但是富集之后可以在检出限内进行定量)。缺点是需要确认合适的预处理步骤。

      具体的浓缩的预处理过程务必由客户提供,因为不同目标物质浓缩步骤往往有所区别,根据目标物选择合适的浓缩步骤,对检测结果的准确性有着至关重要的作用。

      4. 仪器的检出限是多少?

      答∶正如毒理学中“抛开剂量谈毒性”的含义,HPLC检出限也并不是一个准确值。

      检出限的定义为:某特定分析方法在给定的置信度内可从样品中检出待测物质的最小浓度或最小量。即,抛去其他细节因素,主要影响HPLC检出限的是测试方法以及对应测试物质。

      举例:假如客户A的样品是液体样,需要检测其中四环素的含量。那么我们需要先按照测试方法设置好仪器,然后进标样,直到可以判定标品中存有浓度明显高于空白(大多是3倍噪声)的四环素出峰,这一标样浓度可以称为检出限。

      如果在自身样品各种信息都没有提供的前提下,直接问仪器检出限是多少?就说明欠缺对检出限定义、HPLC基础原理的理解。

      5. HPLC和LCMS最显著的区别?

      答∶液相色谱可以后搭多种检测器,如紫外检测器,荧光检测器、蒸发光检测器、质谱检测器等。搭配质谱检测器的这类成为LCMS。两者本身的重点就有所偏重。前面几种检测器,在判定物质时,更依赖于标品定性,一般是默认一个峰为一个物质,因此对分峰要求较为严格;而LCMS由于其质谱检测器的灵敏性,重点在于碎片的区分。即使LCMS上显示是一个峰,也可以根据质谱数据判定前半个峰、后半个峰、甚至峰顶是否是同一个物质。所以属于两种检测手段,两者数据不具有对比性。

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