【摘要】 本文档详细阐述抑菌圈实验的原理，即药物在琼脂平板上扩散形成抑菌圈以评估抗菌效果；介绍三种主要方法（K-B法、牛津杯法和打孔法）的操作流程；并应用实例分析竹荪荪提取物对大肠杆菌的抑菌效果，通过比较不同提取剂和部位（菌裙与菌柄）的差异。文档强调该实验的经济性、精确性和在抗生素筛选、药物分析中的广泛应用，同时引用研究数据支持结论。

抑菌圈实验原理与应用规范【微生物检测·标准方法】​

核心原理与定义​

抑菌圈实验通过测定测试物质在接种细菌的琼脂培养基上扩散形成的无菌生长区域直径​（抑菌圈直径），评估药物/材料的抗菌效能。关键机制包括：

  • 测试物质在琼脂中扩散形成浓度梯度；
  • 抑菌圈直径与物质抗菌活性强度正相关；
  • 抑菌圈直径≥10mm表示细菌敏感，＜10mm提示细菌耐药。

 

主流方法分类【ISO标准·实验方法】​

方法体系对比

方法名称​

​别名​

​操作要点​

​K-B法​

滤纸片法

使用灭菌滤纸片浸样后贴于平板培养

​牛津杯法​

杯碟法

放置灭菌牛津杯并注入样品后培养

​打孔法​

-

平板打孔后直接注入样品培养

 

抑菌圈实验标准流程【操作指南·微生物学】​

全流程环节分解​

1.实验菌种准备​

  • 配制待测药物原始溶液；
  • 通过划线培养技术激活并纯化菌种（如大肠杆菌）。

2.平板制备​

  • 制备含测试菌的琼脂平板；
  • 无菌条件下操作：
    • 放置牛津杯 ​或​
    • 使用打孔器/钢管打孔；
  • 注入待评估药剂。

3.培养观察​

  • 恒温培养箱中培养指定时间；
  • 检查抑菌圈形态并测量直径（单位：mm）。

 

竹荪提取物抑菌案例研究【药食两用真菌·抑菌活性·2024】

实验设计与发现​

  • ​样本来源​：竹荪菌裙与菌柄（Dictyophora）；
  • ​提取剂对比​：4种溶剂提取物抑菌效能对比；
  • ​评价指标​：
    • 抑菌圈直径；
    • ​最低抑菌浓度（MIC）​。

 

关键结论【竹荪提取物·大肠杆菌】​​

  • 所有提取剂对大肠杆菌均有抑制作用；
  • 抑菌效果因提取剂类型与竹荪部位​（菌裙/菌柄）存在差异：

不同提取剂提取的竹荪荪提取物对大肠杆菌的抑菌效果不同，如图1所示：

图1. 不同提取剂提取的竹荪提取物对大肠杆菌的抑菌效果[1]

 

抑菌圈实验应用与演进【技术发展·自动化检测】​

核心应用场景​

  • ​抗生素效价测定​（如青霉素类）；
  • ​抗生素产生菌分离筛选；
  • ​药物分析项目​（如中草药抑菌性评价）。

技术升级趋势​

  • ​自动化抑菌圈测量仪​：提升直径测量精度与效率；
  • ​标准化流程​：保障结果可重复性（参考K-B法国际规范）。

方法优势总结​

  • 操作简便性：无需复杂设备；
  • 经济性：低成本材料（琼脂/滤纸片）；
  • 结果可靠性：抑菌圈直径可量化比对。

 

参考文献：[1]王博阳,张宁宁,陈丽燕,等.不同提取剂对竹荪提取物抑菌效果影响[J].宁德师范学院学报(自然科学版),2024,36(01): 77-82.

 

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