-196℃高效液相色谱法

高效液相色谱(HPLC)是生物化学、药理学、环境科学等研究领域中应用最广泛的分析方法之一。

为了分离具有多种性质的分析物，各种模式，如正相模式，反相(RP)模式，离子交换和尺寸排除已被开发用于HPLC，几乎所有的分离都在大约室温下进行。

另一方面，由于温度是色谱分离的一个重要参数，人们对高低温范围内的HPLC分离进行了研究。在RP-HPLC中，已有报道使用100 ~ 200℃的高温水作为低环境负荷的流动相，高温下传质速率的加快往往导致分离效率的提高。

另一方面，低温高效液相色谱法在早期被用于热不稳定分子的分析。制备性分离也用于不稳定的合成和天然化合物，如小的有机化合物、复合物和蛋白质。此外，低温下的高效液相色谱有时被用于对映体分离，其选择性在低温下被成功地提高了。

在另一种低温高效液相色谱方法中，Okada等人^[1]提出了在约-12至-15℃的低温下使用冰作为固定相或冰色谱的高效液相色谱法。Tomohiro建立了以液化气为流动相的超低温高效液相色谱法(HPLC)^[2]。

低分子量烷烃在-196℃条件下用液氮流动相高效液相色谱分离成功，而在-196℃条件下用氦气流动相气相分离由于吸附作用强，不能洗脱。在-196°C下进一步研究HPLC之前，研究了柱温对色谱行为的影响，发现当柱温超过流动相沸点时，分析物的保留量急剧增加。

在-196°C的高效液相色谱中，研究了氮和甲烷混合物的流动相。在氮气流动相中加入甲烷抑制了四氘甲烷、乙烷和丙烷的保留率，即在超低温下的保留率可以通过流动相组成来控制，类似于典型的HPLC保留率。

在-196°C的高效液相色谱中测定了对正构烷烃和异构烷烃的选择性，并与常温下的气相色谱进行了比较。

在-196℃的高效液相色谱中，与烷烃相比，二氧化硅和烯烃之间的保留率显著增强。

1.Ooms B .Temperature control in high performance liquid chromatography[J].LC GC Europe, 1996, 9(9):574-585.

2.Tomohiro,Motono,Shinya,et al.High Performance Liquid Chromatography at -196 C.[J].Analytical Chemistry, 2016, 88(13):6852-6858.

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