【摘要】 实验过程中使用组合恒化器-改良的罗宾斯装置（MRD）模型系统在聚氯乙烯（PVC）盘上形成成熟的生物膜。

医疗器械和假体植入物在人类中的使用增加导致细菌感染的增加，表皮葡萄球菌已成为最常见的原因。BA Sanford等人[1]开发了一种凝集素-生物素测定法，用于特异性检测在化学定义的培养基中生长的表皮葡萄球菌RP62A和M187sp11产生的黏液。

 

实验过程中使用组合恒化器-改良的罗宾斯装置（MRD）模型系统在聚氯乙烯（PVC）盘上形成成熟的生物膜。原位固定的标本是：1）用钌红染色；2） 与生物素标记的凝集素（WGA、琥珀酰WGA、Con A或APA）反应过夜，然后用金标记的外亲和素处理；或3）使用免疫金程序与抗表皮葡萄球菌RP62A荚膜多糖/粘附素（PS/A）的抗体反应。实验过程中通过TEM进行观察检测，TEM结果显示，特异性结合N-乙酰葡糖胺的W G A和琥珀酰WGA（S-WGA）仅与细胞相关和胞外黏液反应。相反，Con A、APA和抗PS/A与细菌细胞表面反应，但不与黏液反应。

 

TEM的凝集素-生物素测定程序直接证明了W G A和S-WGA可以作为原位黏液的特异性标记。这些凝集素是用于酶联凝集素吸附分析的潜在有力工具，用于定量生物材料表面原位产生的黏液，以及筛选临床分离的凝固酶阴性葡萄球菌产生黏液。此外，荧光W G A可用作分子探针，用激光扫描共聚焦显微镜研究生物膜的结构这些研究正在进行中。

 

[1] B A Sanford, V L Thomas, S J Mattingly, M A Ramsay, M M Miller, Lectin-biotin assay for slime present in in situ biofilm produced by Staphylococcus epidermidis using transmission electron microscopy (TEM), Journal of Industrial Microbiology, Volume 15, Issue 3, 1 September 1995, Pages 156–161, https://doi.org/10.1007/BF01569820.

 

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