【摘要】 这项研究使用病毒纯化、负染色和电子显微镜显示了 DTMUV 的超微结构，应用电镜技术获得了清晰完整的病毒体，为进一步研究坦布苏病毒的形态分类提供了重要依据。

鸭坦布苏病毒（DTMUV）是一种新出现的有包膜黄病毒。这项研究使用病毒纯化、负染色和电子显微镜显示了 DTMUV 的超微结构，应用电镜技术获得了清晰完整的病毒体，为进一步研究坦布苏病毒的形态分类提供了重要依据。用病毒悬浮液接种9天大的鸭蛋，在37℃下孵育3天。尿囊液离心后的上清液，在4°C下以100,000 x g超离心3小时，并在磷酸盐缓冲盐水(PBS, pH 7.0)中重悬。然后用30,45,60%的不连续蔗糖梯度进行超离心纯化悬浮液，然后用PBS稀释。最后，将纯化后的病毒用超离心法制成颗粒，去除蔗糖。将纯化的DTMUV涂于碳包覆的栅格上，发光放电，用20 μl 3%磷钨酸染色5 min，风干。用100 keV的透射电镜(TEM, JEOL JEM-100CX)对样品进行观察。由于表面包膜对表面张力起支撑作用，DTMUV颗粒大多呈球形。鸭Tembusu病毒粒子的糖蛋白外结构域形成模糊的条纹，而不是可视化的尖峰。原因是整个粒子都被染色渗透，透镜捕捉到更复杂的病毒元素。只有当染色剂对颗粒的渗透较弱时，才能在病毒颗粒上看到病毒尖刺。电子显微镜检查显示成熟的 DTMUV 颗粒直径为 50 至 75 nm，典型的包膜黄病毒结构由内部核衣壳、脂质双层内层和 E 糖蛋白胞外域组成。颗粒似乎大多是球形的。特别是RNA核心颜色深且致密，衣壳和脂双层都清晰可见，衣壳形成正六边形，E糖蛋白胞外域形成条纹而不是可见的尖峰[1]。

[1]LUO, X., LIU, Y., JIA, R.,et al. Ultrastructure of duck Tembusu virus observed by electron microscopy with negative staining[J]. Acta Virologica, 2018, 62(03): 330-332.

 

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