【摘要】 流式细胞术可以区分活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死性细胞。

细胞死亡在生理学上很重要，可能是结构性损伤的结果，也可能是一系列被称为细胞凋亡的程序性细胞过程。细胞凋亡的病原性改变发生在许多疾病中，包括癌症、病毒感染、自身免疫性疾病、免疫缺陷和退行性疾病。发展准确和可重复性的诱导和检测细胞凋亡的实验室方法对这些条件的研究至关重要。检测细胞死亡的方法有很多，包括DNA断裂法、原位末端标记法和电子显微镜，尽管每种方法都有其局限性。流式细胞术可以区分活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死性细胞。在该方案中，我们成功地通过化学处理和低pH处理诱导了实体瘤细胞系的凋亡，并优化了使用Annexin V/PI凋亡检测的方法。在细胞培养中研究死亡的重要性变得越来越明显。细胞死亡是生理学的一个重要组成部分，既可以是结构损伤(坏死)的被动结果，也可以是一系列程序性细胞过程(如细胞凋亡)的主动发生。细胞凋亡或程序性细胞死亡(PCD)是一种遗传组织的过程，当生存和增殖信号被移除时，或者当细胞遭受DNA损伤时[1]。经历PCD的细胞被分解成膜结合的凋亡小体或小泡，被邻近的细胞和吞噬细胞摄取[1]。这些凋亡小泡有助于细胞间的交流，并能够将核酸、蛋白质和脂肪传递给其他细胞，帮助伤口愈合和细胞存活[2，3]。成功地优化了实体肿瘤细胞系中细胞死亡的诱导。降低pH模拟了酸性的TME，当pH降低时，会诱发PCD。流式细胞仪Annexin V/PI检测是区分PCD存活细胞和早期和晚期PCD的有用工具，并可与其他标记物相结合来鉴定不同细胞群体中的PCD。该方案将帮助研究人员在一系列肿瘤细胞系中研究PCD。

[1]. Ashkenazi A, Salvesen G. Regulated cell death: signaling and mechanisms. Annu Rev Cell Dev Biol.2014; 30:337–56. https://doi.org/10.1146/annurev-cellbio-100913-013226 PMID: 25150011

[2]. Li M, Liao L, Tian W. Extracellular Vesicles Derived From Apoptotic Cells: An Essential Link Between Death and Regeneration. Front Cell Dev Biol. 2020; 8:573511. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.573511 PMID: 33134295

[3]. Kakarla R, Hur J, Kim YJ, Kim J, Chwae YJ. Apoptotic cell-derived exosomes: messages from dying cells. Exp Mol Med. 2020; 52(1):1–6. https://doi.org/10.1038/s12276-019-0362-8 PMID: 31915368

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