【摘要】 流式细胞术允许通过 FlowJo 软件对 mROS 进行灵敏可靠的定量。我们优化了程序的几个方面，包括缺氧处理、染色缓冲液的工作浓度和定量分析。

肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌的主要类型，是世界上第六大常见癌症。低氧是一种常见的HCC现象，它可以在临床治疗过程中被诱导，旨在通过阻断血液供给，如经导管动脉栓塞或化疗栓塞或一些多靶点酪氨酸激酶抑制剂。HCC对缺氧的适应与侵袭性表型、对化疗和放疗的抗性以及不良预后有关。生物能代谢重编程HCC细胞是对低氧应激的重要适应性反应。糖酵解和代谢之间的交替氧化磷酸化(OXPHOS)对缺氧的反应提供了有利于肿瘤细胞存活的代谢灵活性。线粒体负责总耗氧量的70%-90%，并快速感知和整合应激信号，以协调细胞内适应环境应激的途径，如缺氧。减低线粒体功能因此是降低总耗氧量以使细胞适应缺氧并导致糖酵解代偿性增加的有效方法。糖酵解对于缺氧的肿瘤细胞是不可或缺的，但OXPHOS是比糖酵解更有效的产生ATP的方法。以在常氧和缺氧条件下使用 MitoSOX 染色检测活细胞中的 mROS。流式细胞术允许通过 FlowJo 软件对 mROS 进行灵敏可靠的定量。我们优化了程序的几个方面，包括缺氧处理、染色缓冲液的工作浓度和定量分析。从机理上讲，UQCC3与线粒体形成正反馈环活性氧簇(ROS)在低氧HCC细胞中维持UQCC3表达和ROS产生，随后维持线粒体结构和功能，并稳定HIF-1α表达，以增强低氧下的糖酵解。因此，UQCC3通过同时调节氧磷和糖酵解，在低氧适应过程中对HCC细胞的生物能重编程起着不可或缺的作用。UQCC3和ROS之间的正反馈表明线粒体内的自我调节模型启动了HCC对低氧应激的适应[1]。

[1] Yun Yang, Guimin Zhang, Fengzhu Guo, Qiqi Li, Hui Luo, Yang Shu, Yuge Shen, Jia Gan, Lin Xu, Hanshuo Yang. Mitochondrial UQCC3 Modulates Hypoxia Adaptation by Orchestrating OXPHOS and Glycolysis in Hepatocellular Carcinoma,Cell Reports, 2020, 33(5): 108340.

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