【摘要】 使用带荧光探针的流式细胞仪进一步评估活性氧（ROS）水平。JC-1试剂盒检测线粒体膜电位，透射电镜观察线粒体变化。

众所周知，某些必需矿物质有助于维持细胞的正常结构和功能，以及细胞的生命、生长和增殖。铁就是其中之一，但铁过载会导致葡萄糖代谢紊乱。然而，铁过载诱导β细胞死亡的主要机制仍然未知。在Lina Zhang等人[1]的研究中重点研究了铁过载是否通过氧化应激诱导β细胞死亡。还旨在研究线粒体自噬在这一过程中的作用。实验过程中根据柠檬酸铁铵（FAC）和N-乙酰半胱氨酸的浓度，将INS-1细胞随机分为四组：正常对照组（FAC0μM）、FAC80μM组、FAC160μM组和FAC160μM+NAC组。通过细胞计数试剂盒-8评估细胞增殖。使用带荧光探针的流式细胞仪进一步评估活性氧（ROS）水平。JC-1试剂盒检测线粒体膜电位，透射电镜观察线粒体变化。western-bolt检测相关蛋白的表达，以评估线粒体自噬状态。各种研究表明，线粒体功能障碍在β细胞死亡中起着关键作用。因此研究了FAC处理后的线粒体膜电位（MMP）。JC-1染色法用于评估ΔΨm的损失。用80μM和160μM FAC处理INS-1细胞48小时后，与对照相比，ΔΨM显著降低。同时，用5mM NAC预处理1小时消除了INS1细胞中FAC对ΔΨm的影响。实验结果表示FAC处理降低了INS-1细胞的体外活力，导致线粒体膜电位下降，增加了氧化应激水平，抑制了线粒体自噬。此外，ROS清除剂可以减轻这些影响。实验结果证明，增加的铁过载主要通过PTEN诱导的假定激酶1/Parkin途径增加氧化应激并进一步抑制线粒体自噬，导致INS-1细胞的细胞毒性。

[1] Lina Zhang, Lele Hou, Zulin Liu, Siqi Huang, Zhe Meng, Liyang Liang, A mitophagic response to iron overload-induced oxidative damage associated with the PINK1/Parkin pathway in pancreatic beta cells, Journal of Trace Elements in Medicine and Biology, Volume 60, 2020, 126493.

 

免责声明：部分文章整合自网络，因内容庞杂无法联系到全部作者，如有侵权，请联系删除，我们会在第一时间予以答复，万分感谢。

本文所有内容文字、图片和音视频资料，版权均属科学指南针网站所有，任何媒体、网站或个人未经本网协议授权不得以链接、转贴、截图等任何方式转载。