【摘要】 Brenner和Horne4在1959年创造了“阴性染色”一词。这一过程利用重金属盐包围颗粒，在干燥时支撑它们，并使支撑膜和颗粒中的裂缝变暗。

复发染色是制备用于电子显微镜检查的颗粒标本(如细胞器、大分子和病毒)最常用的方法。它的主要优点是快速，只需要几分钟的准备时间。另一个原因是它避免了一些苛刻的化学物质，如有机溶剂，用于薄切片。此外，它不需要高级的技术技能。它广泛应用于病毒学，既用于病毒的分类，也用于病毒性疾病的诊断。尽管需要相当高的颗粒计数，但通过阴性染色进行病毒鉴定是有好处的，因为不需要特异性试剂，如抗体、核酸探针或蛋白质标准，这些都需要预先了解潜在的病原体，以便选择合适的试剂。此外，它不像在组织培养中生长那样需要活病毒体。1954年，Farrant第一个发表了负染色材料铁蛋白颗粒Hall2和Huxley3后来用磷钨酸(PTA)对病毒进行染色，Brenner和Horne4在1959年创造了“阴性染色”一词。这一过程利用重金属盐包围颗粒，在干燥时支撑它们，并使支撑膜和颗粒中的裂缝变暗。Üranyl acetate和PTA是最常用的染色剂[1]。PTA具有无放射性的优点。然而，它不充当固定剂，在某些情况下可以主动降解病毒。虽然用PTA可以立即检测病毒，但有些病毒如果没有首先固定在戊二醛中，在储存网格后就会降解。这就需要在阴性染色前用水冲洗缓冲液。醋酸铀具有更细的颗粒，不易过度染色，即使在网格上长期储存也能保存病毒的超微结构。染色是通过在一滴上铺设网格，然后用滤纸排水。

[1]Miller, Sara E. Negative Staining: a Valuable Technique for Studying Subcellular Components[J]. Microscopy and Microanalysis. 1997, 3(S2): 341-342.

 

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