体外抗菌活性检测实验案例

实验案例： 首先分别于LB培养基中220 rpm ，37℃条件下培养两种菌体（大肠杆菌DH5α，金黄色葡萄球菌 CMCC26003）至OD600为0.6左右，对应108CFU/mL的浓度。随后将25 μL 浓度约为 107 CFU/mL 的细菌悬浮液 滴加到一块2.54 cm×2.54 cm的棉织物中间位置，然后将另外一块相同大小的棉织物放在上面，并用重物压紧 使得细菌和棉织物能够充分接触。经过 5、10 和 30 min 的接触时间后，然后将这两块棉纤维加入到含有一定 浓度的硫代硫酸钠溶液（这个硫代硫酸钠溶液中包含有 9.5 mL的磷酸缓冲液和 0.5 mL的0.05M的硫代硫酸钠溶 液）的离心管中，4500 g，离心 240 s。离心结束后将棉织物取出，然后吸取离心管中的溶液100μL此打到铺有 琼脂的平板上接种到营养琼脂培养板上，在 37 ℃ 温度下培养 24 h，通过菌落计数法来评价抗菌性能。 4. MIC测试：对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌样品被两倍稀释法测量。样品加入到LB液体中形成均匀的悬 浮液,然后两倍稀释成不同的浓度。每个1毫升的培养基含有不同浓度的测试样本接种0.1毫升106 CFU/ML细 菌悬液, 37◦C下震荡培养24小时，然后观察细菌的生长，不加抗菌样品的试管作为对照，无菌生长的实验 管液体透明，以不长菌管的抗菌剂量为该抗菌剂的MIC。 5. MBC测试 ：对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌样品被两倍稀释法测量。样品加入到LB液体中形成 均匀的悬浮液,然后两倍稀释成不同的浓度。每个1毫升的培养基含有不同浓度的测试样本接种0.1毫 升106 CFU/ML细菌悬液, 37◦C下震荡培养24小时，然后观察细菌的生长，不加抗菌样品的试管作 为对照，无菌生长的实验管液体透明，取其中0.1ml培养液涂布新鲜琼脂平板，37℃下培养24h,观 察无菌落生成，无菌落生成的最低样品浓度计量为该抗菌剂的MBC。