异环磷酰胺的HPLC分析

异环磷酰胺（Ifosfamide）为环磷酰胺的异构体。二者均属抗癌前体药物，经肝脏代谢后激活，药代动力学特征和环磷酰胺类似。

2.RP-HPLC测定血浆中异环磷酰胺和环磷酰胺

(1)色谱条件惇色谱柱:LiChrosorb CR RP-Select B柱（25cm×4.0mm，5um)。流动相:乙腈-0.025mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.0)(25∶75)。流速:1.oml /min。检测:紫外，200nm。

(2)样品测定血样经离心得到血浆。取血浆250pul，加入内标液(200pg/ml 的环磷酰胺50pul或200ug/ml的异环磷酰胺40ul)、0.01mol/L, pH4.0的磷酸盐缓冲液750pl，混合均匀，注入环己基键合相Bond Elut固相萃取柱(预先依次用2ml甲醇处理两次、0.01mol/L, pH4.0的磷酸盐缓冲液1ml处理1次)，用乙腈-0. 01mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.0)(10 ∶90)1ml 冲洗，用乙腈-0.025mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.0) (40∶60) 500ul 洗脱。取20ul进样。色谱图见图16-2。保留时间:异环磷酰胺，约8min;环磷酰胺，约9min。

(3)方法准确度和精密度回收率:异环磷酰胺,89.5%~110.9%(n=8);环磷酰胺，92.8%～114.3% (n=8)。批内RSD:异环磷酰胺，1.4%～3.6%(n=8);环磷酰胺，1.1%~3.3% (n=8)。批间RSD:异环磷酰胺，4.8%～8.6%(n=6);环磷酰胺，2.3%~6. 1%(n=6)。

(4）线性范围和检测限线性范围:异环磷酰胺，5~200ug/ml;1.异环磷酰胺环磷酰胺，5～100ug/ml。检测限:二者均为1pg/ml。

(5)说明作者试验了uBondapak C,柱(30cm× 3.9mm，10um)、LiChrosphere Ca柱(25cm × 4mm，5um，封端）和LiChrosorb Cg RP-Select B柱(25cm × 4. Omm,5um)，只有后者能给出满意的峰形和基线分离。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

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【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

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