【摘要】 溶剂提取RP-HPLC 测定生物样品中伊曲康唑

1．溶剂提取RP-HPLC 测定生物样品中伊曲康唑

(1）色谱条件惇色谱柱:RSiL C18 HL柱(15cm×2.1mm，5um)。流动相:水-乙腈(40 : 60，内含0.05%二乙胺)。流速:0.5ml/min。检测:紫外，263nm;254nm。

(2）样品测定血样:取血浆1～2ml，加内标溶液（2或10ug/ml R51012甲醇溶液〉100ul、0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8) 1ml，用己烷-戊醇（98.5∶ 1.5) 4ml提取10min，有机相用0. 05mol/L硫酸溶液3ml 反提取，离心，酸水用浓氨溶液碱化(pH9)，再用上述混合溶剂提取⒉次，每次2ml，提取液在45℃水浴中氮气流吹干，残渣加流动相100ul溶解，取40pul进样。保留时间:伊曲康唑，4.34min;内标物，5.79min。

生物组织:加4倍量水匀浆，分取匀浆1~2ml，照血浆处理方法操作。

(3)方法准确度和精密度提取回收率:血浆，75.1%(RSD 为3.1%，n=11);组织，64%~73%。RE:一5.3~＋1.0%。RSD:小于8.5%(n =6)。

(4）线性范围和检测限线性范围:0.050~10. 0pg/ml (内标物浓度1.0ug/ml);0.005~1.00ug/ml(内标物浓度0. 1pg/ml)。检测限: 1ng/ml。定量限(准确度为＋9.0%﹔RSD为13.9%):5ng/ml。

(5)说明流动相中加入二乙胺可有效抑制碱基的解离。内标物R51012为依曲康唑的同系物，以3-甲基-丁基-1替代丁基-2。

 

2半微量RP-HPLC测定血中依曲康唑

(1)色谱条件惇色谱柱:Ultrasphere ODS柱(15cm×4.6mm,5um)。保护柱:Ultra-sphere ODS 柱(5cm×4. 6mm，20um)。流动相:水-乙腈-二乙胺(40∶60 ∶ 0.05)。流速:1.5ml/min。柱温:24℃。检测:紫外，261nm或254nm。

(2）样品测定取血浆(或血清)100pul,加内标溶液(0.25pumol/L R51012甲醇溶液)300pl、涡旋60s,离心2min,取20pul进样。保留时间:依曲康唑,6. 1min;内标物,8.5min。

(3)方法准确度和精密度提取回收率:95%~101%。批内RSD:3.8%(o. 1umol/L，n=10)。批间 RSD: 6.2%(0. 25umol/L，n=9)。

(4）线性范围和检测限线性范围:0.01～6umol/L。检测限（S/N=2):8nmol/L。(5）说明若使用乙腈、乙醇、三氯醋酸或流动相沉淀蛋白时，峰形不良，色谱效果不理想。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.