【摘要】 溶剂提取RP-HPLC 测定生物样品中氯法齐明等吩嗪类药物

氯法齐明(Clofazimine,B-663)口服吸收不完全;吸收后迅速进入各组织,血中浓度甚低﹔自组织中释放缓慢,消除半衰期约为70天;约1%由尿中排出。

氯法齐明不溶于水,极微溶于乙醇,微溶于乙醚,溶于氯仿、冰醋酸、二甲基甲酰胺。

氯法齐明为吩嗪类药物,其HPLC测定多采用RP-HPLC。生物样品的预处理采用溶剂提取法,提取溶剂可使用氯仿、二氯甲烷或氯仿-甲醇混合溶媒提取,其检测限可达10ng/ml。也可使用固相萃取,测定结果更加准确、重现。氯法齐明一般采用紫外检测。当进行体内代谢产物及其结合物的分离检测时,也可使用二极管阵列、质谱等手段,确认结构。

溶剂提取RP-HPLC 测定生物样品中氯法齐明等吩嗪类药物

(1)色谱条件﹐色谱柱: Bondclone Cia柱(30cm×3.9mm,10um)。保护柱:Bondapak柱。流动相:水-冰醋酸-四氢吠喃(594 ∶ 6 ∶400,内含己烷磺酸0.471g)。流速:1.5ml/min。柱温:18~21℃。检测:紫外,285nm。

(2)样品测定肝脏:取样品0. 1g,加超纯水lml,匀浆,倾入含内标物2pg (B4100二氯甲烷溶液,于40℃蒸干溶媒〉的试管中,用5mol/L氢氧化钠溶液1ml洗涤匀浆管,洗液并入匀浆,加二氯甲烷2ml,超声提取5min,离心15min,分取有机相1.1ml,置自动取样容器中,于40℃加热2h,除净溶剂,残渣加含醇四氢呋喃(乙醇60pl,加入四氢呋喃10ml) 60pl溶解,取20pl进样。色谱图见图15-28a。保留时间:内标物,3.9min ;氯法齐明,5.6min。血清:取血清1ml,置含内标物2ug 的试管中,加5mol/L氢氧化钠溶液lml,二氯甲烷2ml,照肝脏测定法提取操作,取20pul进样。色谱图见图15-28b。脂肪:取样品0.1g,照肝脏项下方法操作,离心后,弃去上层水相,二氯甲烷相中加入10%乙醇制氢氧化钠溶液1.5ml,80℃加热至泡沸停止(除净二氯甲烷),加入超纯水6ml和二氯甲烷2ml,混合5min,离心10min,弃去水相皂化层,二氯甲烷层用同法再处理二次,取二氯甲烷层1.1ml,置自动取样容器中,同法操作,取20pl进样。

(3)线性范围和检测限﹐线性范围:血清或肝脏,0.01~50ug/ml,脂肪,0.02~100ug/ml。定量限:血清,0.02pg/ml;组织,0. 02pg/g。

 

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