【摘要】 离子对RP-HPLC测定血浆中异烟册甲磺酸盐及其代谢物
3、离子对RP-HPLC测定血浆中异烟册甲磺酸盐及其代谢物
(1)色谱条件色谱柱:uBondapak phenyl柱(30cm×3.9mm,10pum)。流动相:10mmol/L磷酸盐缓冲液内含0.25mmol/L磷酸四丁基铵,pH4.1)。流速:1.0ml/min。检测:紫外,280nm。
(2)样品测定取血样1ml,加磷酸铵0.6g、0. 2mol/L磷酸溶液(含内标物烟酰胺)140pl,缓缓摇匀,离心10min,取上清液与乙腈1ml 混合,提取3次,有机提取相用氮气流吹干,残渣用磷酸盐缓冲液(pH4.1) 100ul洛解,取50pal进样。
(3)方法准确度和精密度提取回收率:异烟腓甲磺酸盐,71.3%(RSD 为7.7%,n=5); 异烟脚,97.6%(RSD为2.8%,n=5);乙酰异烟腓,104.6%(RSD 为3.3%,n =5)。批间RSD:异烟腓甲磺酸盐,4.7%﹔异烟腓,5.4%﹔乙酰异烟腓,5.1%。
(4)线性范围和检测限线性范围:均为1~25pg/ml.
(5)说明异烟阱甲磺酸盐(IHMS)在pH3~5时最稳定(4h内未检测出分解产物),且回收率无显著性差异,但以pH5为最高。故此,血样采用酸化至pH5.0后用适量乙腈提取。流动相中加入离子对试剂(磷酸四丁基铵),可增加IHMS的容量因子及与干扰物的分离度。
4、电化学检测 RP-HPLC测定血浆中异烟腓前体药物
(1)色谱条件异烟腓测定﹐色谱柱:LC-CN柱(25cm×4.6mm,5pm)。流动相:异丙醇-水(5 t 95,内含5g/L甲酸铵)。流速:1.Oml/min。检测:电化学,工作电位+0.8V。
ACON测定﹐色谱柱:Supelco C。柱(25cm× 4. 6mm,5um)。流动相:甲醇-水(40 ∶ 60,内含5g/L甲酸铵)。流速:1.0ml/min。检测:紫外,254nm(制剂分析),313nm(血浆分析)。
(2)样品测定异烟腓测定:取血浆250pul,加10%硫酸锌溶液150pul,涡旋混合,离心1min,分取上清液350pul,加甲醇100pul,混合,离心,取上清液5ul进样,电化学检测。保留时间:4.4min。
ACON 测定:取血浆5pul直接进样〈最大进样量50pul)。保留时间:异烟腓,2.3min ;2-FPAA,3min; ACON,6min。
( 3)方法准确度和精密度提取回收率:异烟腓,73.9%~81.4%。批间RSD;3.07%~20.9%。
(4)线性范围和检测限线性范围:异烟腓,2~10pg/ml。检测限(S/N=3):0. 1pug1ml.
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