异烟肼的HPLC分析-3

3、离子对RP-HPLC测定血浆中异烟册甲磺酸盐及其代谢物

（1）色谱条件色谱柱:uBondapak phenyl柱(30cm×3.9mm,10pum)。流动相:10mmol/L磷酸盐缓冲液内含0.25mmol/L磷酸四丁基铵，pH4.1)。流速:1.0ml/min。检测:紫外，280nm。

(2)样品测定取血样1ml，加磷酸铵0.6g、0. 2mol/L磷酸溶液（含内标物烟酰胺)140pl,缓缓摇匀，离心10min，取上清液与乙腈1ml 混合，提取3次，有机提取相用氮气流吹干，残渣用磷酸盐缓冲液(pH4.1) 100ul洛解,取50pal进样。

(3)方法准确度和精密度提取回收率:异烟腓甲磺酸盐，71.3%(RSD 为7.7%，n=5); 异烟脚，97.6%(RSD为2.8%，n=5);乙酰异烟腓，104.6%(RSD 为3.3%，n =5)。批间RSD:异烟腓甲磺酸盐，4.7%﹔异烟腓，5.4%﹔乙酰异烟腓，5.1%。

(4)线性范围和检测限线性范围:均为1～25pg/ml.

(5)说明异烟阱甲磺酸盐（IHMS)在pH3~5时最稳定（4h内未检测出分解产物)，且回收率无显著性差异，但以pH5为最高。故此，血样采用酸化至pH5.0后用适量乙腈提取。流动相中加入离子对试剂（磷酸四丁基铵)，可增加IHMS的容量因子及与干扰物的分离度。

4、电化学检测 RP-HPLC测定血浆中异烟腓前体药物

(1)色谱条件异烟腓测定﹐色谱柱:LC-CN柱(25cm×4.6mm，5pm)。流动相:异丙醇-水（5 t 95，内含5g/L甲酸铵)。流速:1.Oml/min。检测:电化学，工作电位＋0.8V。

ACON测定﹐色谱柱:Supelco C。柱(25cm× 4. 6mm，5um)。流动相:甲醇-水(40 ∶ 60，内含5g/L甲酸铵)。流速:1.0ml/min。检测:紫外，254nm(制剂分析)，313nm(血浆分析)。

(2)样品测定异烟腓测定:取血浆250pul，加10%硫酸锌溶液150pul，涡旋混合，离心1min，分取上清液350pul，加甲醇100pul，混合，离心，取上清液5ul进样，电化学检测。保留时间:4.4min。

ACON 测定:取血浆5pul直接进样〈最大进样量50pul)。保留时间:异烟腓，2.3min ;2-FPAA，3min; ACON，6min。

( 3）方法准确度和精密度提取回收率:异烟腓，73.9%~81.4%。批间RSD;3.07%~20.9%。

(4)线性范围和检测限线性范围:异烟腓，2~10pg/ml。检测限(S/N=3):0. 1pug1ml.

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

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