甲氧苄啶的HPLC分析

甲氧苄啶(Trimethoprim，TMP)口服吸收迅速、完全，吸收后广泛分布于全身组织和体液，蛋白结合率为30%一46%，80%~90%以原型排出。

甲氧苄啶在氯仿中略溶，在乙醇或丙酮中微溶，在水中几乎不溶﹔在冰醋酸中易溶;可溶于稀矿酸。

甲氧苄啶，人们称之为磺胺增效剂，常与碘胺类药物配伍使用。故此，通常与磺胺类药物同时检测,HPLC分析可参考磺胺类药物测定法,由于甲氧苄啶分子结构中不含磺酰胺结构，其碱性较其它磺胺类药物强，在RP-HPLC分离检测时，在ODS柱上会产生一定的拖尾现象，可采用反相离子对色谐法，以十二烷基磺酸或四丁基铵盐(·3作为反离子，也可使用扫尾剂三乙胺(3"改善其拖尾现象。但离子对色谱法对色谱柱有一定的损害作用，应予注意。

• 固相萃取RP-HPLC测定培养基中甲氧苄啶及磺胺甲曙唑含量

(1)色谱条件色谱柱:Hypersil ODS 柱(10cm ×4.6mm，5pum)。流动相:甲醇-10mmol/L磷酸盐缓冲液(pH2.5)(5:95,内含4mmol/L溴化四丁基铵)。流速:2ml/min。检测:紫外，254nm。

(2)样品测定︰取培养基,离心(4℃)15min，取上清液0.1ml，注入预先用甲醇2ml与水2ml 处理后的Bond-Elut环己烷基硅胶萃取柱，注入内标溶液（2~10ug/ml磺胺唿啶溶液)0.1ml，用水1ml 冲洗，用甲醇1.5ml洗脱〈若培养基中含有二溴丙咪羟乙磺酸盐，则洗脱剂中需加入0.1%高氯酸溶液0.5ml)，洗脱液于60℃空气流吹干，残渣加水0.1ml，涡旋溶解，取20pl进样。保留时间:在10min内出峰顺序为甲氧苄啶、对氨基苯甲酸、内标物、磺胺甲曙唑、二溴丙咪羟乙磺酸。

(3)方法准确度和精密度方法回收率:甲氧苄啶和磺胺甲曙唑,96.5%。提取回收率;甲氧苄啶,94.4%(RSD为4.73%，n=5);磺胺甲嗯唑,92.8%(RSD 为2.76%,n=5)。

(4)线性范围和检测限﹑线性范围:甲氧苄啶和磺胺甲喝唑，10~50pug/ml。检测限(S/N=3)。甲氧苄啶，100ng/ml;磺胺甲嗯唑，120ng/ml。

(5)说明使用环己烷键合硅胶柱可获得较RP-18柱更高的提取回收率。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.