【摘要】 虽然不同的质粒包装系统与不同的宿主细胞系的运用使得生产病毒的具体方法有所不同

虽然不同的质粒包装系统与不同的宿主细胞系的运用使得生产病毒的具体方法有所不同,但是在长期的实验过程中,人们还是摸索出了几种对于病毒生产具有普遍积极意义的培养基添加物,以下进行介绍。

 

在某些瞬时转染法生产病毒和稳表细胞系生产病毒的实验中,慢病毒部分结构基因的表达沉默是一种较为常见的现象。这往往会导致病毒包装效率发生10-30倍的下降。由于发生这一现象较为普遍,可以排除是偶然现象,但是目前具体机制尚不清楚,可能与表达系统空间结构相关。在细胞培养基中添加2-10mM的丁酸钠被公认为是一种诱导质粒上基因表达的有效办法。丁酸钠可以诱导组氨酸超乙酰化,引起转染进入细胞的质粒更高效的转录和表达。也有实验证实它可以有效的促进HIV-1的LTR和CMV启动子的作用。另外也有科学家证实,丁酸钠能有效地减少多个相互距离较近的强启动子之间的相互干扰作用。而这一现象正是第三代病毒包装质粒中经常出现的。这样一来丁酸钠就非常适宜在短时间的慢病毒连续生产中使用,可以在病毒包装过程中造成一个连续的出毒高峰,给工作带来巨大便利。总而言之,丁酸钠在基因表达效率不高的病毒包装达系统中,具有很好的提升转录和翻译效率的作用,但是在低浓度存在时(如0.1mM)对于表达系统无明显促进作用,一般的工作浓度在5-20mM范围内。

 

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