【摘要】 相对定量法即为在一定样本中, 存在一参照样本，将靶序列相对于参照样本量变化情况进行分析。

在上期内容中，我们了解到PCR技术包括绝对定量法和相对定量法，本期我们继续深入了解相对定量法。

 

相对定量法即为在一定样本中, 存在一参照样本，将靶序列相对于参照样本量变化情况进行分析。相对定量法需要有参照物, 所以在作定量标准曲线时要相对容易一些,仅需要确定标准品的稀释度就可以进行比较和分析。相对定量法不仅可以用来分析靶基因与内参基因在同一样品中拷贝数的比值，同时也可用来分析不同样品之间、同一样品的不同部位之间甚至某一个样品的某一个部位在不同动态时期之间的某一靶基因的mRNA水平上表达量的比值。在相对定量中，模板浓度不同导致产生误差，需要用内参基因来消除，从而达到对靶基因的初始量进行校正的目的。双标准曲线法和2-ΔΔCT法是常用的校正方法[1,2]。

 

双标准曲线法是分别采用内参基因和目的基因作标准曲线，目的基因和内参基因同时进行扩增，对他们各自的标准曲线进行分析计算样本的初始表达量。内参基因必须满足以下特征：需要和待测基因进行一样的扩增；研究样品之间具有相近的表达量；处理因素不会对这些表达量产生影响[3]。

 

2-ΔΔCT法是对Ct值进行比较的相对定量法。通过将待测靶基因片段和内参照基因片段进行同时扩增, 在一个或两个反应管中进行扩增反应, 测定两者的Ct值之差。

 

  • 李萌; 李雪; 郑志强, 实时荧光定量PCR技术的应用及研究进展[J], 饲料博览. 2018,(07).

  • 梁子英; 刘芳，实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展[J], 现代农业科技. 2020,(06).

  • 徐丽华;刘春雷;常玉梅;梁利群;刘金亮, 双标准曲线相对定量PCR试验原理与方法, 生物技术通报. 2011,(01).

 

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