流式细胞术中的细胞凋亡用7-氨基放线菌素D染色

7-氨基放线菌素D(7-AAD)是一种DNA染料，用于在流式细胞术中区分活细胞、凋亡细胞和晚期凋亡/死亡细胞。已经描述了几种使用7-AAD的染色方案，但没有关于7-AAD浓度对读数的影响的数据。因此，我们用PE-Annexin V凋亡检测试剂盒和细胞死亡检测ELISAPLUS试剂盒比较了1、5、10和20lg/ml7-AAD作用20min对淋巴细胞和CEM人白血病细胞的染色结果。7-氨基放线菌素D(7-AAD)1是放线菌素D的荧光衍生物，选择性地与DNA的GC区结合^[1]。在低浓度(0.5-5lg/ml)的流式细胞术中，7-AAD经常用于染色和排除死亡细胞^[2-5] 在较高浓度下(10-20lg/ml)，7-AAD也被用来区分活细胞(7-AAD阴性)和死亡细胞(7-AADdim)或死亡细胞(7-AADbright)，因为细胞膜的通透性低，因此荧光强度在早期凋亡的细胞中低，而在晚期凋亡和死亡的细胞中高。结果表明，用5、10、20lg/ml7-AAD染色，不能用1lg/ml7-AAD染色，适合于流式细胞术中细胞凋亡的定量。用20 mg/ml7-AAD与Jurkat和T3M-4细胞在4，C作用20分钟，通过细胞分选和随后的TUNEL分析和形态评估染色表明，7AAD可以正确地识别早期和晚期的凋亡/死亡细胞群，并可用于流式细胞术分析凋亡。7-AAD的成功染色也被报道为10克/毫升，30分钟。本研究首次比较了不同浓度的7-AAD对测定结果的影响。我们首次证明，5、10和20lg/ml7-AAD染色(20min、4、C，黑暗中)同样适用于早期和晚期凋亡/死亡的淋巴细胞和CEM细胞的染色，而1lg/ml不宜。此外，我们对协议进行了改进，省略了耗时的固定步骤。综上所述，7-AAD法是一种廉价、简便的细胞凋亡定量方法。

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