流式细胞仪在分析免疫缺陷患者的B细胞亚群中的应用

B细胞是适应性免疫系统的基本组成部分之一，以其产生抗体的能力而闻名^[1]。在各种类型的先天免疫缺陷中，抗体缺陷是受影响个体数量最多的一组。并不是所有的抗体缺陷都是由于B细胞的固有缺陷，但研究B细胞的数量和功能是诊断过程的关键部分。临床上对B细胞的研究几乎都是以流式细胞术为主要研究工具^[2]。流式细胞术的优势在于它允许在单细胞水平上对B细胞进行绝对和相对计数，并对其表型和功能进行评估，同时允许对大量细胞进行分析。随着流式细胞仪的日益复杂，越来越多的荧光标记可以同时使用；现在可以在单个细胞上测量20多种成分。虽然抗体是流式细胞术中最常用的探针，但也有其他几种。其中包括将各种细胞成分(如蛋白质、DNA和/或RNA)与酶的荧光底物特异结合的染料^[3]。最常见的临床流式细胞术检测是免疫表型应用。这些应用被用来根据细胞表面和细胞内蛋白的表达来计数各种B细胞亚群。获得的数据可能有助于疾病的诊断和分类，或评估预后因素和治疗靶点(例如CD20)。我们应该注意，大多数流式细胞仪应用程序使用相对计数，结果是以相对频率(百分比)提供的。例如，B细胞数量是以淋巴细胞的百分比提供的。淋巴细胞绝对计数可由血细胞分析仪(多平台检测)得出。目前，最常见的绝对计数方法是在样品中加入内部微珠计数标准(单平台测试)。将已知数量的微珠添加到已知体积的样品中，然后通过对流经流式细胞仪的微珠进行计数来测量体积。一些流式细胞仪可以通过测量体积来计算绝对计数，但目前很少在临床实践中使用。必要时，必须使用重叠的、单独的非歧视性标记来定义B细胞亚群。有多个有效的定义可以用来定义子集，即使使用相同的标记集。这些标记中的许多连续的、非二进制的表达加剧了这一点，从而导致了进一步的变异性。有大量关于B细胞及其亚群在B细胞免疫缺陷中的文献。正确的解释需要熟悉测试的实用性和局限性。B细胞亚群分析很少单独诊断。流式细胞术的结果需要相关的解释来帮助诊断和理解B细胞免疫缺陷。

[1]Abraham, R.S., Aubert, G., 2016. Flow cytometry, a versatile tool for diagnosis and monitoring of primary immunodeficiencies. Clin. Vaccine Immunol. 23, 254–271.

[2]Adamo, L., Rocha-Resende, C., Mann, D.L., 2020. The emerging role of B lymphocytes in cardiovascular disease. Annu. Rev. Immunol. 38, 99–121.

[3]Agematsu, K., Nagumo, H., Shinozaki, K., Hokibara, S., Yasui, K., Terada, K., Kawamura, N., Toba, T., Nonoyama, S., Ochs, H.D., Komiyama, A., 1998. Absence of IgD-CD27(+) memory B cell population in X-linked hyper-IgM syndrome. J. Clin. Invest. 102, 853–860.

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