长春碱的HPLC分析

长春碱(Vinblastine，VBL)是从夹竹桃科植物中提取的一种生物碱,临床上使用其硫酸盐的注射剂。本品主要经肝脏代谢，由胆汁和肾脏排出。代谢产物有4-O-去乙酰基长春碱（DVBL)、4-O-去乙酰基长春碱-3-酸(DVBLA)等。硫酸长眷碱易溶于水，溶于甲醇、氯仿，其乙醇溶液在214nm . 259nm处有最大吸收。

乙腈通常用作生物样品的蛋白沉淀剂,加入二倍体积的乙腈能完全去除血浆蛋白.也可以在磷酸酸性下，用氯仿提取血浆、尿和组织中的长春碱。用氰基固相萃取小柱浓缩样品，选择性好。以硅胶为固定相的离子交换色谐法可用于测定生物样品中的长春碱和代谢产物，也有用反相色谱法，如使用CND和ODS固定相。紫外检测的灵敏度较低，电化学检测和荧光检测能使长春碱的检测水平达到1ng/ml 以下。

1.HPLC 测定血浆和尿中长春碱及其代谢产物

VBL和DVBL测定:

(1)色谱条件﹐色谱柱:Spherisorb Si柱(25cm× 2mm，5pum)。流动相:乙腈-0. 01mol/ L柠檬酸盐缓冲液（pH3.0)(85∶15，含0.01mol/L溴化四丁基铵)。流速:0.2ml/ min。检测:荧光，270nm/320nm.

(2)样品测定︰取血浆或尿样500pul，加入内标液(10mg/L，长春曲醇的乙腈溶液〉10pul、0. 5mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.0) 2.5ml，混合。加入氯仿5ml，混合10min，离心10min。转移有机相于另一试管中，于37℃氮气流吹干。残渣溶于100pl流动相中，取80pul进样。出峰顺序:内标物、VBL、DVBL。

(3)方法准确度和精密度﹐回收率:血浆和尿中VBL.和DVBL,100%。日内RSD:血浆中VBL，6.7%(n=70)，血浆中DVBL，7.3%(n=70);尿中VBL，2.5%(n=32);尿中DVBI.,3.2%(n=32)。日间RSD:血浆中VBL,7.8%(n=8);血浆中DVBL,8.4%(n=8);尿中VBL，4.5%(n=7);尿中DVBL，4.4%(n=7)。

(4）线性范围和检测限﹑线性范围:VBL，1~1000pg/L;DVBL，1~100pg/L。检测限;均为1ug/L。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

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【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

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【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

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