【摘要】 RP-HPLC测定原料药中的塞替派

塞替派(Thiotepa)为乙烯亚胺类烷化剂。在水、乙醇或氯仿中易溶。水溶液不稳定。

《美国药典》(第23版）用反相液相色谱法测定塞替派原料药，用紫外法检测。用类似的色谱条件，测定人血浆中药物的浓度，样品经C18固相萃取小柱浓缩，用乙腈洗脱，提取回收率为86.1%。用柱前衍生化荧光检测法能测定血浆中的塞替派及其代谢产物替派。

 

1.RP-HPLC测定原料药中的塞替派

(1)色谱条件﹐色谱柱:Cya柱(15cm×4mm)。流动相:水-乙腈(9∶1)。流速:0.8ml/min。检测:紫外，215nm.

(2)样品测定精密称取约75mg原料药，置于50ml 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取10pu进样。

(3)方法准确度和精密度RSD:≤2%。

(4)说明﹐分离度测定:取10mg 塞替派对照品，置于4ml小瓶中，加入2ml甲醇，摇匀，加入0.1%磷酸50pul，加盖后，65℃加热50s。冷却至室温，加入甲醇1ml，摇匀。经色谱分离后，甲氧基塞替派和塞替派的相对保留时间分别为1.25和1.0，分离度≥3.0，塞替派色谱峰的拖尾因子≤1.8.

 

2.荧光检测RP-HPLC测定血浆中塞替派和替派

(1)色谱条件色谱柱:Hibar L.iChrosorb RP-18柱(25cm×4mm，5pum)。保护柱:L.iChroCART RP-18柱。流动相:乙腈-0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.7)(28 ∶72)。流速:1.Oml/min。检测:荧光，340nm/ 440nm。

(2)样品测定取血浆lml，加水2.2ml，混匀。取3ml，注入Extrelut3固相萃取柱。15min后,用氯仿洗脱样品。取最初8ml洗脱液，于20℃氮气流吹干，残渣溶于500pl 正丙醇中，取100pl，置于具塞试管中，加入A液10pl，80℃水浴加热30min，冰浴冷却。加入B和C液各400pl，放置10min，取20微升进样。

(3)方法准确度和精密度回收率:塞替派,66-1%～80.3%(n=4)﹔替派，72.1%~72.3%=4)。

( 4）线性范围和检测限︰线性范围:塞替派，1.5～378ng(正丙醇溶液)﹔替派，3.5~346ng (正丙醇洛液)。

(5) 说明试剂配制:硫化钠-EDTA液(A): 40mmol/L硫化钠水溶液和50mmol /L Na,EDTA水溶液等体积混合。氨基乙磺酸液（B):0. 2mmol/L氨基乙磺酸，溶剂为0. 1mol/L磷酸盐缓冲液，pH 8.0。邻苯二甲醛溶液(C):0. 3mmol/L邻苯二甲醛，溶剂为0.1mol/L磷酸盐缓冲液，pH 8.0.

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

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【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

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