【摘要】 负染色技术通常使用1%或2%的负染色剂的水溶液，但在某些情况下，只要染色剂诱导的电子散射不变得太大，就没有理由说明这个浓度不应该是更低或者更高。

负染色技术通常使用1%或2%的负染色剂的水溶液，但在某些情况下，只要染色剂诱导的电子散射不变得太大，就没有理由说明这个浓度不应该是更低或者更高。在浅色负染不充分的情况下，只有靠近碳支撑膜的蛋白质区域可能会被染色。这种负染特征(单面负染)是Nermut几年前从他对完整腺病毒和腺病毒六邻体的研究中得出的结论。

 

然而，与这种情况相反的是，随着更完整的“总深度”负染，来自病毒和蛋白质上部的图像可能占主导地位，或者来自上部的信息可能与来自靠近碳支撑膜的区域的信息重叠。这可能会导致随着样本上染色深度的增加而产生不同的图像。只风干覆盖部分蛋白质的负斑点很可能会产生某种分子扁平化的现象，即使人们认为被负斑点包围的部分在三维条件下被合理地保存得很好，但这绝不是绝对正确的。使用负染色-碳膜(NS-CF)程序生产二维蛋白质晶体有一个明显的趋势—负染色的程度会非常的浅。然而，传统的负染和负染碳膜技术都取得了令人满意的二维效果。部分染色和分子扁平化相关的生物分子也适用于从负染色蛋白质中进行的单颗粒三维重建。一般来说，由于部分分子扁平，二维晶体中的分子可能比随机分散的分子受到较少的分子扭曲力，从而导致了单个二维晶体中不均匀的负染色渗透。保留在阴性染色中的蛋白质水合量是一个很难确定的参数，可以合理地假设，一旦标本处于电子显微镜的真空中，这个量就非常低。因此，碳水化合物，特别是葡萄糖的负染是为了维持蛋白质的水合作用，从而维持蛋白质的构象。