【摘要】 研究电子显微镜标本制备技术发展的历史学家可能会注意到,Hall和Huxley描述的病毒图像中的反差是部分去除阳性染色的结果。

研究电子显微镜标本制备技术发展的历史学家可能会注意到,Hall和Huxley描述的病毒图像中的反差是部分去除阳性染色的结果。Sydney Brenner和他的同事面临的问题是找到一种合适的制备方法来对大量噬菌体组分进行采样,最终他们找到了一种用电子致密染色剂包围蛋白质颗粒的方法,并避免在低pH值下使用阳性染色溶液。在高倍放大下检测时,他们尝试使用遮蔽的方法来增加噬菌体制剂的对比度,但收效甚微。

 

前文中提到了蒸发的Au/Pd金属的颗粒化水平,由于空气干燥缓慢导致的噬菌体成分的变形、塌陷和分解也很明显。此外,用于观察噬菌体尾部结构修饰的过氧化物处理的噬菌体样本无法轻易制备,噬菌体悬浮液与高浓度和低浓度的磷钨酸(PTA)溶液混合时也同样遇到了巨大困难,因为混合后噬菌体头部会立即裂解,DNA会释放到样品中。科研人员在之后的实验中又做出了一些探索,例如,用1 M KOH液滴定中和PTA,在乙酸铵(1%) 中配制一系列0.5%至2%的磷钨酸钾溶液,并与噬菌体样品混合,此时,混合物保持稳定,没有噬菌体头部裂解的迹象。将来自混合物的 Vaponefrin玻璃雾化器的液滴喷射到碳涂层网格上,然后在Elmiskop I电子显微镜中进行测试,在40,000倍放大下观看时,这些图像非常引人注目,能够非常清晰的观察到噬菌体嵌入电子致密染色池中。与未染色的悬浮液阴影样品相比,完整噬菌体及其成分的保存非常显著。