利福平的HPLC分析-2

2．蛋白沉淀RP-HPLC测定血清中利福平

(1)色谱条件惇色谱柱:Radial-pak Cia柱。保护柱:Quard-pak C,柱。流动相:乙腈-0.01mol/L醋酸酸钠缓冲液(pH7)(320 ∶620)。流速:2.0ml/min。检测:紫外，340nm。

(2)样品测定取血清25ul，加入内标溶液（1pg/ml对硝基酚甲醇溶液）125pl，混匀，沉淀蛋白。静置5min，离心(10000r/min）5min，取上清液9Opl进样。保留时间:内标物，3.5min;利福平，6min。

(3)方法准确度和精密度﹐方法回收率:100.7%(5.0～15.0pug/ml，n=8)。RSD;2.24%(11.97pg/ml,n=10)

(4)线性范围和检测限线性范围:检测上限为40pg/ ml。

(5)说明样品用量仅25pul，可于耳垂或指尖采用毛细管取血，待血液凝固后，直接在毛细管（一端融封）中离心，在血清与血细胞分界处，近血清端折断，分取血清。亦可使用抗凝毛细管分取血浆测定。

3．固相萃取RP-HPLC测定血浆中利福平

(l)色谱条件﹐色谱柱:Zorbax RX C。柱(25cm×4.6mm ， 5um)。保护柱:BrownleeRP-8柱(l.5cm ×3.2mm，7um)。流动相:乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(45 ∶55).流速:1ml/min。检测:紫外，340nm。

(2)样品测定︰取血浆0.5ml，加内标溶液(l00ug/ml 舒林酸水溶液)25ul ,0.1rmol/L盐酸溶液100ul，涡旋混合，注入预先依次用甲醇1ml、水 1ml 处理后的C。Bond Elut固相萃取柱，用水1ml 冲洗，再用甲醇1ml 洗脱至含抗坏血酸溶液（3mg/ml) 500ul 的容器，混匀，取150pul进样。色谱图见图15-16。保留时间:利福平，4.4min，内标物，7.8min。

(3)方法准确度和精密度提取回收率:利福平,97%;内标物,93%。方法准确度:1.8%~一6.0%(150~20000jng/ml，RSD 为6.0%,-n=6×3)。批内和批间RSD:均小于6.1%(n=6×3)。

(4）线性范围和检测限线性范围:50~～35000mg/ml。定量限:50ng/ml。

(5)说明利福平的标准储备液可制成2mg/ml的甲醇溶液,内含lmg/ml 的抗坏血酸作为稳定剂，可使用6个月。固相萃取柱洗脱液洗至抗坏血酸溶液中，亦为防止利福平的氧化。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

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