利福平的HPLC分析

利福平(Rifampicin，RFP)口服吸收可达90%~95%，蛋白结合率为80%~91%,在肝脏中极易代谢，其主要代谢物25-去乙酰基利福平(DR)、3-甲酰基利福平(FR〉和3-甲酰-25-去乙酰基利福霉素SV(FDR)。利福平及其代谢物多自胆汁排泄﹐仅1/3经由尿排泄，其中6%~15%为原型、15%为活性代谢物DR和FDR，无活性代谢物FR占7%。近年来发现利福平对AIDS病毒有一定抑制作用，且其体内主要代谢物DR和FDR等均具有抗菌活性，所以对其在体内代谢物的HPLC研究多有报道。

利福平极易溶于氯仿，溶于醋酸乙酯或甲醇，微溶于乙醇、乙醚或丙醇，几乎不溶于水(pH7.5时，1∶ 360，pH降低时，溶解度增大)。利福平遇光易变质，水溶液不稳定，尤其在碱性溶液中更易氧化;其1%水混悬液pH4~6.5，在较低pH时可水解生成无活性的3-甲酰利福霉素SV(FR)。在样品制备或生物样品的预处理过程中均应注意。

1．溶剂提取RP-HPLC测定血浆中利福平及其代谢物

(1）色谱条件惇色谱柱:Nucleosil C柱（25cm×4. 6mm，5m)。流动相:乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钾缓冲液(O.2mol/L磷酸调节pH4.0)(38:62)。流速:1.2ml/min。柱温:40℃。检测:紫外，340nm。

(2)样品测定取血浆0. 5ml，加0.5mol/L磷酸二氢钠缓冲液（用0.5mol/L磷酸二氢钾调节pH7.2) 2ml，加内标洛液（20ug/ml 盐酸罂粟碱溶液）100ul、氯仿7ml，机械振荡10min，离心10min，弃去上层水相，分取下层有机相5ml，于38℃氮气流吹干，残渣加乙腈-异丙醇(1 ∶ 1) 30pul溶解，取20pul进样。保留时间;DR，3.5min;内标物，4.5min;FDR，5.5rmin;利福平，6.7min;FR，15min。

(3）方法准确度和精密度提取回收率:利福平，88%;DR，93%﹔内标物，90%。方法准确度:利福平，99.7%~100.7%(RSD为2.0%，n=5); DR，98.0%~101.0%(RSD为2.0%，n=5)。

(4）线性范围和检测限线性范围:利福平和 DR，均为0.5～10pg/ml。检测限(S/N=3):利福平，0.1pg/ml:DR，0.06pg/ml ,

(5）说明代谢物DR、FDR、FR等因含量甚微，未进行定量。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

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