【摘要】 柱切换 RP-HPLC测定血浆中磺胺甲曙唑和甲氧苄啶

4．柱切换 RP-HPLC测定血浆中磺胺甲曙唑和甲氧苄啶

(1)色谐条件分析柱:Chromsep C柱（20cm × 3.Omm，5pum)。预柱:PL.RP-S柱(15~25yum)，u.Bondapak C-18/Corasil 柱（37~～50pm)。分析流动相:测定SDM,0.05mol/L磷酸钾溶液(pH6.5)-乙腈(85∶15);测定SMZ，0.05mol/L磷酸钾溶液(pH5.6)-乙腈(88∶ 12);测定TMP，0. 05mcl/L 磷酸钾溶液（内含0.2%三乙胺，pH6.0)-乙腈(90 ∶ 10)。预处理流动相:测定SDM,SMZ及其乙酰化代谢物，0.05mol/L.磷酸盐溶液（pH4.6)﹔测定TMP及其代谢物，0.05mol/L磷酸盐溶液(pH8.2)。流速:分析流动相，0.8m1/min;预处理流动相，1.0ml/min。检测:紫外，27Onm。柱温:30℃.柱切换:0~4min，预处理流动相冲洗预柱;4min，切换至与分析柱相联;4~6min，分析流动相反冲至分析柱;6min，切换至初始状态;分析流动相洗脱分析柱。

(2)样品测定取血浆1.0～2.0ml，置离心管中，加等量乙腈，强烈振荡15s，放置10min使蛋白沉淀完全，再次混合并离心10min，上清液分成二等份，分别用于磺胺类(及其代谢物）和甲氧苄啶(及其代谢物）测定。

磺胺类及其代谢物测定:取一份去蛋白血浆，用pH3.5的0.5mol/L醋酸铵缓冲液(每1ml上清液约需100l)调节pH4.5，混合，立即取1.Oml，注入Extrelut固相萃取柱中，放置10min，用二氯甲烷6ml 洗脱至内含0.05mol/L 氢氧化钾溶液1.oml的试管中，密塞并经机械混合10min，离心2min，水相移置另一试管，氮气流吹10s，精密吸取水相600ul，置取样容器内，用约25ul的1mol/L磷酸调节pH4.0~5.0，混合，取200～500ul 进样。

甲氧苄啶及其代谢物测定:取另一份去蛋白血浆,用pH6.6的0.5mol/L磷酸钾缓冲液(每1ml上清液约需20pul)调节pH8.o,混合,取1.oml,注入 Extrelut固相萃取柱中,放置10min,用二氯甲烷-异丙醇(95 ∶ 5)6ml 洗脱至内含0. 05mol/L磷酸1.0ml 的试管中,密塞并经机械混合10min,离心2min,水相移置另一试管中,氮气流吹30s ,精密吸取水相600ul,用约45pul的 lmol/L氢氧化钾溶液调节pH6.0一7.0,混合,取200~500ul进样。

保留时间:4'-去甲基TMP (M,)，3.7min;3' -去甲基TMP (M,)，4.9min;N'-乙酰化SDM (N'-AcSDM),5.9min;N'-乙酰化SMZ(N'-AcSMZ) , 6.8min; SMZ,8.7mingTMP，9. 6rnin ; SDM，9.9min。

(3)方法准确度和精密度﹐提取回收率:除M,外均大于90%。RSD:均小于11%。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

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