【摘要】 固相萃取RP-HPLC测定体液中磺胺甲喝唑和甲氧苄啶

3.固相萃取RP-HPLC测定体液中磺胺甲喝唑和甲氧苄啶

(1) 色谐条件﹐色谱柱; pBondapak C,柱(30cm×3.9mm)。保护柱;Pelliguard parti-cals C,柱（2cm)。流动相:1%醋酸-乙腈(82∶18)。流速:2.5ml/min。检测。紫外，240nm。

(2) 样品测定血样:取血浆0.5ml ,加枸橡酸盐缓冲液(0.1mol /L枸橡酸溶液75ml、0. 1mol/L枸惨酸钠溶液425ml，加水至1000ml，并调节pH5.5)0.5ml，涡旋混合，5一10s内减压通过预先依次用甲醇、枸椽酸盐缓冲液处理后的C18固相萃取柱,并用缓冲液冲洗二次，每次1ml，真空抽干，用甲醇1ml 洗脱，洗脱液于45℃用氮气流吹干，残渣用流动相0.25ml 溶解,取  100pul进样。色谱图见图15-2。保留时间:甲氧苄啶，4.0min;磺胺甲恶唑，9.6min。

尿样:取尿样0.2ml，加枸椽酸盐缓冲液(pH5.5)0.8ml，涡旋混合，通过固相萃取柱，放置5min，用甲醇-氯仿(3∶97）洗脱2次，每次4ml，洗脱液于45℃用氮气流吹干，残渣用流动相0.25ml溶解，取100pl进样。

(4)线性范围和检测限线性范围:磺胺甲嗯唑，1.00~83.04g/ml《血样》和2.16~100.8pg/ml(尿样);甲氧苄啶，0.05~～7.88pg/ml(血样)和2.13~99.4pg/ml(尿样)。

(5)说明在该色谐条件下，甲氧苄啶一的代谢产物对磺胺甲嗯唑和甲氧苄啶的测定无干扰，保留时间依次为:a-(2,4-二氨基-5-咤啶基)-3，4,5-三甲氧基苯甲醇，2.3min;N'-OxTMP和3DM-TMP，2.6min;N"-OxTMP，4.5min;4DM-TMP，4.6min;N'-AcTMP，12.8min。

有文献报道使用磺胺二甲氧嗪作为内标物，以提高方法的精密度。内标物以乙腈-水(5∶20）制成0.6rg/ml 的溶液使用，内标物的保留时间约为5.5min。

 

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