吡嗪酰胺的HPLC分析

吡嗪酰胺(Pyrazinamide)( 1)口服吸收迅速，蛋白结合率约50%，体内主要代谢物为毗嗪酸(l)，5-羟基吡嗪酰胺（)和5-羟基吡噪酸（Ⅳ)等。

吡嗪酰胺在水中略溶，乙醇中微溶，乙醚中极微溶解。

吡嗪酰胺的HPLC分析均采用RP-HPLC，以缓冲液为流动相或在缓冲液中加入少量的有机改性剂甲醇或乙腈。生物样品可采用高氯酸沉淀蛋白)，二氯甲烷-乙醚提取”，或蛋白沉淀后溶剂提取""，或在线固相萃取("2。HPLC的洗脱通常采用等强度洗脱，梯度洗脱T适用于血浆中吡嗪酰胺与其它抗结核药及其代谢物的同时测定。

1．蛋白沉淀RP-HPLC测定血浆中吡嗪酰胺

(1)色谱条件﹑色谱柱:LiChroCart RP-8 柱(25cm×4.6mm，5pum)。保护柱:RP-8 (5cm×4.6mm，10um)。流动相:乙腈-10mmol/L磷酸盐缓冲液（pH3.5)(1 ∶9)。流速:1.5ml/min。柱温:25土1℃。检测:紫外，215nm。

(2)样品测定取血浆0.2ml,加内标溶液(12.5pg/ml对乙酰氨基酚甲醇溶液)8pl、甲醇200pl、0.2%抗坏血酸溶液（含1mol/L.磷酸二氢钾)1ml，调节pH4.2，加二氯甲烷-乙醚（2∶3）提取二次，每次7ml，振荡15min，离心10min，合并提取液﹐45℃水浴挥干，残渣加甲醇50pul，涡旋溶解30s，取60pl进样。保留时间;吡嗪酰胺，2.9min;内标物，3.9min。

(3)方法准确度和精密度提取回收率:69%(20ug/ml)。批间RSD:1.3%~8.6%。(20pg/ml，n=6)。

(4)线性范围和检测限线性范围:2.5~40zg/ml 。

(5)说明采用二次提取，可将提取回收率由55%提高到69%﹔提取液中加入抗坏血酸亦有利于回收率的提高。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

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【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

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