【摘要】 慢病毒载体法(LV)有许多优点，它不仅能够感染分裂细胞，还能感染不分裂的细胞；它能高效地介导外源目的基因在宿主体内稳定表达，遗传给后代；其操作简单、表达广泛、转染的细胞类型较多；还克服了逆转录病毒表达沉默的不足。

慢病毒载体法(LV)有许多优点，它不仅能够感染分裂细胞，还能感染不分裂的细胞；它能高效地介导外源目的基因在宿主体内稳定表达，遗传给后代；其操作简单、表达广泛、转染的细胞类型较多；还克服了逆转录病毒表达沉默的不足。因此，该方法在转基因方面得到了广泛的应用。

 

采用脂质体2000介导EGFP基因共转染293T细胞，使LV在脂质体的作用下，把外源基因导入细胞，并使LV在宿主细胞复制产生具有一次感染能力的假病毒。然而，影响293T细胞转染的因素有很多，如细胞形态、传代次数、培养液的酸碱度、血清含量、转染处理时间等均对293T细胞转染有影响。通过研究发现细胞的形态是决定转染成败的关键性因素。细胞形态差时，质粒DNA很难通过细胞核膜进入核内，进而无法高拷贝数地将质粒DNA整合到细胞核内，使细胞的转染率大大降低。

 

多数学者认为，转染一般在3~12h就可以，但也有人认为转染处理时间为8h和10h时转染率高。研究发现，转染处理时间为6h的细胞形态正常，变形程度很小；转染处理时间8h时细胞的形态变形明显，当转染处理时间到10h时细胞就开始明显脱落，并且随时间的延长脱落越严重。所以，选择细胞刚开始变形且细胞贴壁状态仍然良好时期进行转染可得到高滴度的慢病毒。考虑到这一点，可适当增加转染的DMEM培养液的量，相应降低了脂质体的浓度。适当增加转染的 DMEM 培养液的量，既能减少了脂质体对细胞的伤害，又能延长转染处理时间，提高脂质体对细胞转染率和慢病毒包装滴度。

 

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