【摘要】 荧光衍生化RP-HPLC测定尿样中儿茶酚胺

荧光衍生化RP-HPLC测定尿样中儿茶酚胺

(1) 色谱条件﹐色谱柱:CAPCELLPAK Ca柱(25cm× 4. 6mm，5um)。流动相:20mmol/L四硼酸钠和 30mmol/L丁基硼酸的缓冲液，用稀磷酸调节至pH8.0。流速:0.8ml/min。检测:荧光，400nm/475nm。在线反应器à不锈钢反应管〈5m×0.5mm，置于100℃)和一冷却管(3m×0. 5mm，置于15℃).

(2) 样品测定﹐取含有0.025mol/L HCI作为防腐剂的尿样0. 5ml，加入异丙肾上腺素（内标物）溶液100pl(相当于500ng）和2.omol/L氨缓冲液〈pH8.5，含有0.2%二苯基硼酸氨基乙酯和0.5%EDTA)1ml，再与含1%正辛醇和0.25%(w/v）溴化四辛基铵的正庚烷溶液4ml 混合，手动振摇2min后离心分离，然后取有机相3ml，与正辛醇2ml和 0. 08mol/L醋酸0.4rml混合，手动振摇2min后离心5min。取水相100ul进样。保留时间:NE，8min;E，10min; DA，13min;内标物，28min。

(3) 方法准确度和精密度回收率:NE、E、DA都在95%～103%范围内。RSD(n=6): NE，5.39%;E,2.01%;DA,4.15%(均以50ng/ml的对照品溶液重复进样)。

(4) 线性范围和检测限惇线性范围:NE、E和DA都是4~100ng/ml （对照品溶液)。检测限:NE，0. 1ng; E，0. 2ng: DA，0.8ng.

(5) 说明儿茶酚胺在碱性介质中受热后产生很强的荧光，但此荧光会立即熄灭。而加入硼酸盐则可以维持稳定的荧光强度。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

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【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

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