【摘要】 针对斑马鱼幼鱼切片制备难题，详解琼脂石蜡双包埋法操作流程及优势。对比传统石蜡包埋技术，该方法有效解决组织变形破碎问题，提升显微结构观察质量，适用于微小生物样本研究。

组织病理分析是评估斑马鱼等动物模型实验效果的核心方法。高质量的病理切片能清晰揭示疾病进程，为诊断提供关键依据。传统石蜡切片需经历固定、脱水、包埋等十余道工序，任一环节失误均会影响切片质量。理想的石蜡切片应满足：细胞核质分明、染色对比适中、组织形态完整。

图1. 琼脂石蜡双包埋法与单纯石蜡包埋法制作切片实验流程比较[1]

 

包埋技术的关键性

包埋是将支持介质（如石蜡）渗透至组织内部，形成均匀固态结构的过程，直接影响切片厚度与完整性。对于斑马鱼幼鱼这类微米级样本，传统石蜡包埋存在明显缺陷：

  • 高浓度乙醇脱水导致组织收缩
  • 二甲苯透明剂破坏微小结构
  • 样本易弯曲破碎（见图2A）

图 2. 石蜡包埋法与琼脂石蜡双包埋法经脱水、透明、蜡化后的组织形状对比[1] A为石蜡包埋法组织，见明显变形、弯曲；B为琼脂石蜡双包埋法组织，形态保存完好。

 

琼脂石蜡双包埋法的突破

借鉴电镜超薄切片技术，研究人员创新采用琼脂预包埋联合石蜡二次包埋方案：

1.​琼脂预包埋：固定斑马鱼幼鱼空间位置

2.石蜡二次包埋：增强结构支撑性

 

效果对比验证

  • ​传统石蜡法：73%样本出现体轴弯曲（图2A）

  • ​双包埋法：91%样本保持完整形态（图2B）

 

技术优势与适用性

该方法显著提升斑马鱼幼鱼切片质量：

✓ 避免微小组织破碎

✓ 减少脱水收缩效应

✓ 操作便捷（仅增加琼脂预固化步骤）

适用于昆虫胚胎、植物组织等脆弱样本，为发育生物学研究提供可靠技术支撑。

 

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