AFM测试样品制备

在做原子力显微镜AFM测试时，科学指南针检测平台工作人员在与很多同学沟通中了解到，好多同学对AFM测试不太了解，针对此，科学指南针检测平台团队组织相关同事对网上海量知识进行整理，希望可以帮助到科研圈的伙伴们；

有衬底的样品

样品台最大尺寸200 mm（这里以Bruker仪器为例），样品表面最大起伏一般要求1微米以下。

块体样品：块体直径大于10 mm时，清洁样品表面（氮气吹扫或酒精丙酮等试剂清洗）后放置在样品台打开真空吸附固定样品，块体直径小于10 mm时，需要将样品粘贴到铁片上后进行测试（图1）；

薄膜样品：清洁表面，尺寸要求和上述块体一样，固定在样品台上测试；

图1有衬底样品的制备 (a) 样品制备到硅片上 (b) 样品制备到金属片上

无衬底样品

生物样品：将溶液分散后滴到干净硅片或云母上，静置10分钟，用氮气吹干后测试；某些生物大分子，需要特定的吸附固定方式，比如DNA分子，为了增强带负电荷的DNA和同样带负电荷的云母基底间的相互作用力，在DNA样品中加入一些二价阳离子如Mg2+，Zn2+等。

细胞等活性生物样品：

（1）大气环境下扫描

1）细胞固定可以采用自然干燥法，但是经过此法处理的细胞与活细胞状态相差甚大。

2） 溶液固定法

①：将培养好的细胞用2.5 %戊二醛固定10分钟，之后用氮气吹干

②：琼脂糖凝胶固定法，对细胞几乎没有损伤，可以更好的维持细胞的原始状态。

3）为防止其他因素（如培养液里面的盐等成分结晶或聚集）的干扰，要注意对样品进行清洗，根据经验进行。

（2）液体环境下扫描

液相环境下，由于细胞与基底接触不是很牢固，细胞有时会跟着探针滑动，成像稳定性稍差，可以用琼脂凝胶固定法或对基底表面进行聚赖氨酸（表面带正电）修饰，利用聚赖氨酸与细胞（表面带负电）间的静电相互作用来固定细胞。粉末：将粉末放入酒精或丙酮中超声一段时间后分散均匀，将溶液滴到云母或硅片、玻璃片上，加热烘干后用氮气吹扫表面后进行测试；

薄膜（有机或无机薄膜）：将薄膜裁剪合适大小后，用专用双面胶带粘贴到基底上（一定固定牢固，薄膜贴平，无气泡、倾斜或大的起伏等），氮气吹扫后进行测试。

测试需要导通的样品

有衬底样品：衬底表面需镀金、铂等导电薄膜，将衬底用导电银浆固定在样品台上，保证衬底上表面和样品台导通（图2）；

无衬底粉末：将粉末放置在溶液中超声分散，滴到导电衬底上后烘干，放置在样品台上进行测试。

图2 测试需要导通样品的制备 (a) 导电银浆粘贴样品(b) 铜胶带连接用品表面和样品台

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