【摘要】 固相萃取RP-HPLC测定牛奶中异烟腓

1.RP-HPLC测定固体制剂中异烟腓含量

(1)色谱条件﹐色谱柱:Spherisorb ODS柱(25cm×4.6mm，5um)。流动相:甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液(75∶ 25)。流速:1.oml/min。检测:紫外，286nm。

(2)样品测定取片剂（或胶囊）20片（或粒)，精密称定，研细，精密称取细粉适量（相当于300mg 的利福平、200mg 的异烟册)，加流动相（若为二者的混合物则加甲醇）50ml，振摇10min 使溶解，滤至100ml量瓶中，残渣用流动相洗涤，洗液并入滤液﹐并用流动相稀释至刻度，精密量取适量，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度。取20pul进样。保留时间:利福平，3.2min;异烟册，5.9min。

(3)方法准确度和精密度回收率:异烟腓，99.2% (RSD为0.86%)﹔利福平，98.6%(RSD为0.78%)。

(4）线性范围和检测限﹑线性范围:5~30pg/ml。检测限:异烟腓，35ng/ml;利福平，90ng/ml。

 

2.固相萃取RP-HPLC测定牛奶中异烟腓

(1)色谱条件色谱柱:Li Chrospher 100-CN柱(25cm× 4mm，5um)。保护柱:LiChrospher 100-CN柱(4cm×4mm，5um)。流动相:甲醇-水(40∶60，每1L中含醋酸钠0.41g、冰醋酸10ml)。流速:1.Oml/min。检测:紫外，330nm.

(2)样品测定﹐直接测定:取牛奶2rml，加入20%三氯醋酸0.5ml，混合30s，放置10min，离心15min，取上清液600gul，加入内标溶液（1%肉桂醛甲醇溶液）5pul，涡旋混合，放置5min，取100pul 进样。

浓缩后测定:取牛奶80ml，加入20%三氯醋酸20ml，放置5min，离心15min，薄膜滤过（0.45pum)﹔分取75ml，加入内标溶液1ml，涡旋混合﹔以 5ml/min 的流速通过预先用甲醇6ml和水6ml处理后的SPEC,固相萃取柱,真空抽干10min;用流动相3ml，以0.2ml/min 的流速真空冲洗，再用正己烷5ml，以0.3ml/min的流速真空冲洗，并抽干10min;最后，用甲醇6ml洗脱，洗脱液在35~40℃水浴中真空蒸干，残渣用流动相0.2ml溶解，取100pul进样。保留时间:内标物，5.6rmin;异烟朋，7.4min,

(3)方法准确度和精密度提取回收率:90%~98% (13~77yg/L)。RSD:4%~9%(n=6~8)。

(4）线性范围和检测限线性范围:10~4000pug/L。检测限:0.1pg/L（经浓缩处理)或10ug/L(未经浓缩处理)。

(5)说明﹐当使用阵列二极管确认时，检测限分别为 1pg/L(经300倍浓缩处理)和200pg/L（未经浓缩处理)。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

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