【摘要】 与ChIP-seq相比较，这些方法无需获取可溶性染色质进行免疫共沉淀，具有实验流程简单、耗时短等优势，可以在少量细胞或单细胞水平进行检测。

染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）包含细胞裂解、细胞核提取、染色质制 备以及免疫共沉淀等多个连续步骤，需要的细胞量较大，常规ChIP-seq很难进行少量细胞或单细胞水平的检测。随着近几年来生物领域技术的巨大突破，研究人员利用目的蛋白特异性抗体使MNase或Tn5转座酶“靶向”作用于目的蛋白结合位点附近的染色质，提出CUT&RUN、CUT&Tag等方法。与ChIP-seq相比较，这些方法无需获取可溶性染色质进行免疫共沉淀，具有实验流程简单、耗时短等优势，可以在少量细胞或单细胞水平进行检测。

Schmid等人建立了以酶“靶向”切割染色质的方法：ChIC（chromatin immunocleavage）。为使MNase选择性地作用于目的蛋白结合区域，研究者利用对抗体具有亲和力的Protein A融合MNase（pAMN），通过抗体结合pA-MN融合蛋白将MNase间接结合到目的蛋白。在ChIC实验中，首先利用螯合剂EDTA、EGTA等抑制MNase酶活性，将细胞与含有目的蛋白特异性抗体、pA-MN的缓冲液反应后，用Ca2+激活MNase，使其在特定位点断裂DNA。2016年，Skene和Henikoff小组将ChIC与高通量测序技术结合，提出CUT&RUN。

CUT&RUN中，特异性抗体先与目的蛋白结合，进一步与pA-MN反应，募集pA-MN到结合位点。在0℃下保持较低的酶活性，抗体固定酶后，采用Ca2+激活MNase使其在目的蛋白结合位点附近作用于染色质开放区域，酶切后染色质片段释放，进一步建库测序。2018年，Skene等人对CUT&RUN 实验优化，通过洋地黄皂苷（digitonin）增加细胞膜通透性，释放酶切染色质片段到细胞外，由于未被切割的染色质仍留在细胞内，有利于降低背景噪音。

 

科学指南针为您提供材料测试,主要业务范围包括XPS,普通XRD,透射电子显微镜TEM,全自动比表面及孔隙度分析BET等测试。

 

免责声明：部分文章整合自网络，因内容庞杂无法联系到全部作者，如有侵权，请联系删除，我们会在第一时间予以答复，万分感谢。