【摘要】 所采用的HPLC法有反相色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等。

色谱法用于蛋白质分离已有数十年的历史。近10年来，在这方面取得了很大进展并获得广泛应用。所采用的HPLC法有反相色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等。

离子交换色谱利用蛋白质分子和离子交换剂之间发生的静电作用使填料表面的可交换基团与带相同电荷的蛋白质分子发生交换。采用的流动相为盐水体系，通过调节pH梯度或盐离子强度梯度而分离蛋白质。反相色谱是基于蛋白质在极性流动相和非极性固定相间相互作用的差别将蛋白质加以分离。流动相多采用低离子强度的酸性水溶液，加入有机溶剂作为有机改性剂，加入三氟醋酸或盐酸作为离子抑制剂。凝胶过滤色谱法按蛋白质分子大小加以分离,填料具有-定孔径,大分子蛋白质不能进入小孔穴先出柱，洗脱液为盐的水溶液。亲和色谱利用蛋白质和固定相表面的某种特异吸附而进行选择性分离，没有这种特异吸附作用的分子不被保留而先出柱，然后改变流动相条件，将保留在柱上的样品组分洗脱。疏水作用色谱与反相色谱类似，填料具有疏水性，但疏水性没有反相固定相强，疏水配基- 般为苯基、戊基或聚乙二醇，流动相一般为pH6~8的盐溶液作降浓度梯度洗脱。

用于蛋白质分离的HPLC系统应具有梯度洗脱功能，检测采用紫外检测或荧光检测，紫外检测波长为280nm、254nm或215nm，蛋白质在215nm处吸收较强，故在该波长处检测灵敏度高，但对溶剂要求较高;荧光检测要求多数蛋白质应在检测前进行衍生化反应。

 

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

【4】李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 人民卫生出版社, 2000.

【5】严拯宇. 中药薄层色谱分析技术与应用[J]. 中国医药科技出版社, 2009.

 

科学指南针为超过3000家高校和企业提供一站式科研服务。截止2021年6月：服务1049家高校、2388家企业，提供249所高校研究所免费上门取样服务，平均每天处理样品数5000+、 注册会员数18w+、平均4.5天出结果、客户满意度超过98%。

 

免责声明：部分文章整合自网络，因内容庞杂无法联系到全部作者，如有侵权，请联系删除，我们会在第一时间予以答复，万分感谢。