【摘要】 深度解读细胞毒性三大检测技术：CCK-8法检测活细胞增殖，MTT比色法分析线粒体活性，LDH释放法评估细胞膜损伤。涵盖原理、操作要点及在药物筛选中的应用场景。

细胞毒性检测是评价药物或生物材料安全性的核心环节，通过量化物质对细胞增殖的影响，为药物筛选和生物相容性评估提供关键数据。目前主流方法包括CCK-8法、MTT比色法和LDH释放法，三种技术分别适用于不同研究场景。

 

​CCK-8检测法（细胞计数试剂盒）​

原理

试剂盒中的WST-8成分（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）在电子载体1-MethoxyPMS作用下，被活细胞线粒体脱氢酶还原为水溶性黄色甲臜衍生物。

图1. WST-8作用原理[1]

 

优势与应用

  • 适用贴壁/悬浮细胞（悬浮细胞需延长孵育）
  • 广泛应用于药物活性筛选、肿瘤药敏试验
  • 检测波长：450nm，吸光度与活细胞数正相关

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MTT比色法（噻唑蓝检测法）​

作用机制

活细胞线粒体琥珀酸脱氢酶将MTT（溴化噻唑蓝四氮唑）还原为不溶于水的蓝色甲臜结晶，经DMSO溶解后定量检测。

图 2. 活细胞中MTT四唑盐还原为甲臜示意图[2]

 

关键点

  • 甲臜结晶量与细胞活性成正比
  • 检测波长：570nm
  • 经典应用于抗肿瘤药物IC50计算

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LDH释放法（乳酸脱氢酶检测）​

检测原理

细胞损伤时释放胞内LDH，催化NAD+还原为NADH，后者与四唑盐(INT)反应生成红色甲臜，在490nm处检测。

核心价值

  • 甲臜浓度直接反映细胞损伤程度
  • 适用于膜完整性研究及细胞毒性快速筛查

 

参考文献：[1] Li, Li, et al. "Protective effects of decursin and decursinol angelate against amyloid β-protein-induced oxidative stress in the PC12 cell line: the role of Nrf2 and antioxidant enzymes." Bioscience, biotechnology, and biochemistry 75.3 (2011): 434-442.

[2] Buranaamnuay K. The MTT assay application to measure the viability of spermatozoa: A variety of the assay protocols. Open Vet J . 2021;11(2):251-269.

 

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