【摘要】 为了允许三重染色，即DNA、肌动蛋白丝和免疫标记细胞成分，或DNA和其他两种免疫标记细胞成分，Takeshi Suzuki等人检测了两种荧光染料TOTO-3和TO-PRO-3的DNA染色。

Takeshi Suzuki等[1]检测了五种核酸结合荧光染料，碘化丙啶、SYBR Green I、YO-PRO-1、TOTO-3和TO-PRO-3的核DNA染色通过荧光和激光共聚焦显微镜观察。并且检测了最佳浓度、RNA共染色和漂白速度。

 

当使用荧光素或其衍生物作为荧光染料进行免疫染色时，PI适用于DNA染色。在这种情况下，细胞核中的DNA在绿黄色或蓝色激发（分别为568或488nm激光激发）下出现红色，免疫信号在蓝色激发（488nm激发）下观察为绿色荧光。因为PI与鸟嘌呤和胞嘧啶的核苷酸对结合，PI不仅染色DNA，还染色RNA。SYBR Green I对DNA进行了强烈的染色。

 

SYBR Green I染色的细胞核在蓝色（488 nm）激发下呈绿色。当罗丹明或其衍生物与SYBR Green I联合作为免疫荧光染料时，在绿黄（568 nm）激发下，免疫信号与细胞核形成明显的红色荧光。SYBR Green I优先染色核DNA，因为只观察到少量的胞质RNA染色。SYBR Green I的变化是荧光迅速消退，必须尽快进行观察。

 

YO-PRO-1是一种不渗透的DNA结合染料，在蓝色激发下也用绿色荧光对DNA进行染色。YO-PRO-1的荧光褪色速度慢于SYBR Green I，但该染料对RNA的亲和力略高于SYBR Green I。

 

为了允许三重染色，即DNA、肌动蛋白丝和免疫标记细胞成分，或DNA和其他两种免疫标记细胞成分，Takeshi Suzuki等人检测了两种荧光染料TOTO-3和TO-PRO-3的DNA染色。在荧光显微镜下，TOTO-3和TO-PRO-3发出的信号在荧光显微镜下检测为红色荧光，但在激光共聚焦显微镜下可以转换为蓝色。因此，使用这些荧光染料对激光共聚焦显微镜进行三重染色是可行的。

 

[1] Suzuki T , Matsuzaki T , Takata K .Fluorescence Counter-Staining of Cell Nuclear DNA for Multi-Color Laser Confocal Microscopy[J].Acta histochemica et cytochemica official journal of the Japan Society of Histochemistry and Cytochemistry, 1998, 31(4):297-301.DOI:10.1006/jmbi.2000.4223.

 

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