【摘要】 高效液相色谱法（HPLC）与核磁共振（NMR）的联用测试始于80年代初期，这种测试手段在分离和鉴定混合物、从植物提取物中纯化小分子等领域中具有强大的功能和广泛的用途。

高效液相色谱法（HPLC）与核磁共振（NMR）的联用测试始于80年代初期，这种测试手段在分离和鉴定混合物、从植物提取物中纯化小分子等领域中具有强大的功能和广泛的用途。到目前为止，基于将分离的化合物峰从HPLC引导到NMR探针的LC-NMR联用设计可分为四代，即on-line HPLC-NMR、HPLC-loop transfer-NMR、HPLC-SPE-NMR和HPLC-SPE-TT-NMR。从on-line HPLC-NMR的早期设计中获取的1H NMR光谱（包括流动、停止流动（第一代）和循环转移模式（第二代）），总是遇到低灵敏度和洗脱液干扰等问题，这其中还包括巨大的溶剂信号干扰以及溶剂-缓冲效应对质子化学位移的影响。对于NMR测量，样品溶液中需要氘化载体。因此，从实用的角度来看，D2O是最便宜的氘溶剂。也就是说，可以使用含有D2O洗脱液的反相高效液相色谱法来分离混合物中的某种化合物。同时，如果使用反相高效液相色谱进行基线分离，就可以通过反向探针获得的1H和2D核磁共振波谱进行化合物结构鉴定。因此，通过LC-NMR分析的化合物的极性范围比HPLC-SPE-NMR宽得多。然而，由于NMR的缺点不容易克服，即使应用了多种包括溶剂抑制在内的NMR脉冲程序，LC-NMR在复杂混合物中表征化合物的应用也并不常见。如果在优化HPLC条件之前进行适当的预处理，并结合HRESIMS和其他仪器，会使得HPLC-SPE-(TT)-NMR成为一种极其强大的联用方法，可用于鉴定和表征包括药物代谢物在内的微量有机化合物和杂质，如降解产物以及存在于食品和药物中的生物活性天然化合物。

 

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