生物透射电子显微镜(TEM)

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      生物透射电子显微镜(TEM)

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      仪器型号 HITACHI H-7650;HITACHI HT7800;HITACHI HT7700;FEI Tecnai Spirit;Talos F200C
      预约次数 566次
      服务周期 17.6个工作日
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      项目简介

      生物透射电镜是观察和研究超微结构的重要工具,可用于观察细胞整体结构、亚细胞结构。生物细胞样品内部形态观察建议用专门应用于生物样品观察的透射电镜,其电压在80-120kv可以降低生物样品因高能电子束辐射而损伤的影响,同时依赖于生物样品制备技术的发展,如超薄切片技术、负染色技术、冷冻制样技术、细胞化学技术等,广泛应用于组织学、细胞学、病毒学、病理学及材料学等多个学科的研究中,如常用来观察细胞整体结构、细胞膜细胞壁细胞器的变化、材料进入细胞内部的分布情况、细胞应付外界刺激产生的自噬小体,以及外界生物入侵的侵染结构等等。

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      结果展示

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       图1. I和II是纳米材料进入细胞切片局部和放大图;III是材料附着细胞表面的细胞切片图
         

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      图2.金黄色葡萄球菌在低于药物MIC作用后细胞壁发生溶解
         

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      图3.小球藻细胞形态 图4.斑马鱼组织
         

       

       

      样品要求

      服务流程:

      送样方式:

      可接收固定好的细胞/组织样品并附有详细送检要求的送样单。

      ①需要您提供的样品:收集细胞/组织取样(新鲜迅速取材),置于1.5ml离心管内,加入2.5%的戊二醛溶液(固定液加满离心管,使样品完全浸没在固定液中),可放置于4°C保存,请不要倒弃固定液。

      ②打印填写完整的送样单和样品一起寄送。

      具体取材及固定方法如下:

      1.对于细胞类,106以上的细胞,用细胞刮刀刮下来(不要反复刮取,动作迅速一次性刮取下来),1500-3000转离心,5-10min,收集细胞于管底肉眼可见2-3粒大米状样品,如果细胞量很多,把细胞团块用细针尖挑成几个小团块,弃上清,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,然后放入4°C冰箱保存。

      2.对于组织类,新鲜取材,取材位置准确,组织大小尽量在1-2mm³,离体取材后请立即投入4℃预冷的固定液中,然后放入4°C冰箱固定保存(对于无法下沉的样品,一定要通过抽真空,让样品沉下去)。

      3.对于细菌类,吸取OD0.5-0.8的培养物,离心后弃培养基,收集菌体沉淀于管底黄豆大小,可以用PBS洗1-2次,弃掉上清液,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,然后放入4°C冰箱保存(固体培养的标本取样时尽可能把培养基削薄一点,块切小)。

      其他类型样品前处理可与指南针工作人员沟通!

      *固定液的量请参考上图,加至箭头所示位置

      下列操作由我们完成:

      倒掉固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用1%的锇酸溶液固定样品1-2h;小心取出锇酸废液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用梯度浓度(包括30%,50%,70%,80%,90%和95%五种浓度)的乙醇溶液对样品进行脱水处理,每种浓度处理15min,再用100%的乙醇处理20min;最后过度到纯丙酮处理20min。用包埋剂与丙酮的混合液(V/V=1/1)处理样品1h;用包埋剂与丙酮的混合液(V/V=3/1)处理样品3h;纯包埋剂处理样品过夜;将经过渗透处理的样品包埋起来,70℃加热过夜,即得到包埋好的样品。样品在超薄切片机中切片,获得70-90nm的切片,切片经柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液各染色5-10min,晾干后即可在透射电镜中观察。

      常见问题

      1. 2.5%戊二醛固定液如何配置?

      市售25%戊二醛水溶液                10ml

      0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0)      50ml

      蒸馏水加至                                  100ml

      2. 0.2M,pH7.0磷酸缓冲液的配置方法?

      A液:Na2HPO4·H2O 31.61g,或者Na2HPO4·7H2O 53.63g,或者Na2HPO4·12H2O 71.64g,加蒸馏水至1000ml

      B液:NaH2PO4·H2O 27.6g,或者NaH2PO4·2H2O 31.21g,加蒸馏水至1000ml

      0.2M,pH7.0磷酸缓冲液= A液61ml+B液39ml(合起来是100ml)

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