免疫荧光技术介绍

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应，再借助激光共聚焦显微镜进行组织或细胞内抗原物质的定位。

样品前处理方法（此步骤也可以由平台代做，将收取实验操作以及制片费）

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min。

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）。

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min。

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜。

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI。

8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

细胞免疫荧光成像照片

需要您提供的样品：

根据具体实验需求，客户提供待测实验材料+实验所需一抗。

注意：1.细胞培养加处理与荧光染色平台均可委托处理，实验所需的二抗平台免费提供。

           2.客户所需一抗也可以委托平台购买。

拍摄5-6张照片