生物测试

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周老师

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流式细胞仪

内容简介

流式细胞术简介

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。


细胞前处理以流式周期实验为例)

  1. 收集细胞:弃去上清,加入1 ml PBS清洗一次,弃上清,再加入1 ml 0.25%胰酶消化细胞,待细胞变圆且有部分细胞悬浮,即加入PBS终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞,使细胞悬浮。细胞悬液转入离心管中,1500 rpm离心5 min收集细胞。

  2. PBS洗涤细胞:加入3 ml 4℃预冷的PBS完全重悬细胞,1500 rpm离心5 min,弃上清。沉淀震荡混匀。

  3. 固定过夜:沉淀中缓慢加入-20℃预冷的75%乙醇,重悬细胞,4℃过夜。

  4. PBS洗涤细胞:加入2 ml PBS混匀后,1500 rpm离心5 min收集细胞,PBS重悬,离心收集细胞。加入100 ul PBS重悬细胞。

  5. 去除RNA:加入2 μl 浓度为1 mg/ml 的RNaseA(去离子水配制),37℃水浴40 min。

  6. 荧光标记:加入100 µl浓度为100 µg/ml 的PI染色液(PBS配制),避光染色20 min。

  7. 上机检测:流式细胞仪使用激发波长488 nm,发射波长585±21 nm进行检测,用flowj软件分析细胞周期以确定细胞周期分布。




结果展示

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                            图1                                              图2

图1是细胞凋亡测试,图2是细胞周期测试。

服务说明

需要您提供:

  1. 测试信息(检测细胞表面标志和细胞内某种蛋白时需要您提供抗体)。

  2. 如果需要细胞株(也可我们代购),药物,药物处理,需要告知我们处理时间和方案。

  3. 如果有抗体说明书,也请测试前发给我们看下,帮您确认下测试需求。


所用设备:BD C6 分析型流式细胞仪,BD verse 分析型流式细胞仪。



1·提交需求

在下方下载并填写测试单,描述越清楚,沟通越高效。

2·沟通细节

我们的项目经理会与您沟通确认方案,包括报价、周期和注意事项等。

3·付款确认

请登录个人中心-->我的预约确认订单报价并付款。

4·下载结果

实验完成后您会收到提醒,可登录网站个人中心下载实验结果。
1.对接经理是否已报价
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