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负染色-云现场
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部分论文致谢
项目简介
云现场”实验是科学指南针推出的一款黑科技视频网络体验，用户只需要一部电脑或者移动设备，即可在任何时间、任何地点发起或参与测试过程，实现各种信息的实时共享与协作。测试过程实时直连测试仪器屏幕，与测试老师一对一沟通选区拍摄，所见即所得，媲美现场实验。
生物透射云现场分为制样和云现场拍摄两部分，两部分单独计费，制样为负染色制样。
预约云现场注意事项
1、建议云视频时使用电脑浏览器打开链接。
2、抽真空时间含在测试总时长内，即从样品进仓开始计时，一般在5min左右。
3、测试项目仅拍摄形貌，无能谱。
4、云视频测试时长30min起约，不同样品拍摄速度不均一，平均下来，拍摄速度一般2-3个样/小时（仅供参考），需要拍摄高倍并且仔细找特殊形貌的样品一般拍摄速度更慢些，具体请根据实际拍摄要求准确预约时长。
5、最好不要超时，一般情况下，后面会安排其他客户测试，尽量预约足够时间，比如约了 2 小时，最多可测试时间是 2 小时，2 小时后会结束测试，请合理安排时间；如果后面时间没有其它客户，可以适当延长，费用按实际最终测试总时长计算，多退少补。
6、如临时有事需取消预约，请提前 24 小时联系，可以免费取消，如未提前告知，造成机时损失，按预约时间半价收费。
7、在拍摄过程中遇到问题您有权随时叫停测试，拍摄过程遇到的问题或这不认识的细胞器可以直接和工程师沟通，最终测试费用会根据实际测试时长多退少补。
8、请不要迟到，云视频拍摄链接一般拍摄前5分钟发到拍摄群。
负染色制样方法
参考步骤
（1）将液体取出10 μL。
（2）吸取样品10 μL滴加到铜网上沉淀1 min，滤纸吸去浮液。
（3）醋酸铀 10 μL滴加到铜网上沉淀1 min，滤纸吸去浮液。
（4）常温干燥数分钟。
（5）80-120 kv进行电镜检测成像。
（6）获得透射电镜成像结果。
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结果展示
样品要求
送样要求
可接收样品类型：脂质体、外泌体、囊泡类、蛋白、纤维素、细菌等，其他类型样品请咨询科学指南针工作人员。
1.粉末样品20mg左右，并告知配置比例。
2.液体样品提供100-200μl，提供合适的浓度（上机前直接滴加样品，不做稀释或浓缩）。
①脂质体：送样体积100-200μL，确保制备过程中没有脂质沉淀或未形成囊泡的脂质胶束，浓度在1-2mg/mL，缓冲液尽量避免使用PBS或者Tris等易产生盐结晶的缓冲液，推荐置换成超纯水或低浓度非结晶性缓冲液。
②外泌体/囊泡：送样体积不少于50μL，外泌体悬液浓度建议不低于0.5mg/mL，样品应尽可能纯净，避免混杂大量的蛋白质聚合物、细胞碎片等，这些杂质会与目标颗粒竞争结合染色剂，造成背景杂乱；缓冲液尽量避免使用PBS或者Tris等易产生盐结晶的缓冲液，推荐置换成超纯水或低浓度非结晶性缓冲液。
③蛋白样品：送样体积不少于50μL，缓冲液尽量避免使用PBS或者Tris等易产生盐结晶的缓冲液，推荐置换成超纯水或低浓度非结晶性缓冲液。
④病毒：送样体积50-100μL，需告知生物安全等级，灭活处理（如使用β-丙内酯、γ-射线照射等）后寄送，未灭活的高风险样品会拒收退回，必须去除细胞培养基、磷酸盐缓冲液（PBS）和 Tris 缓冲液。
4.细菌类样品如需要观察菌毛或鞭毛请寄送单菌落平板，并于菌落长出后立即寄送。
负染色的效果可能受到样本的运输时间影响，如需负染色，关于样本准备和测试安排，请提前沟通。
寄送方式
1.负染色的效果受到样本的运输条件和时间影响
2.若样品保存条件是常温，需要常温寄送。
3.若样品保存条件是4℃，需要2-3个冰袋运输。
4.若样品保存条件是-20℃或-80℃，需要干冰运输，干冰消耗量以7kg/d计算，保证足够量的干冰，确保在运输时间内能维持低温。
服务周期
一般为样品接收后的1周左右，如遇法定假期需要顺延，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！
交付内容
提供拍摄机时内所有图片。
结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给指南针工作人员。
常见问题
1. 负染色制样方法流程中染料的浓度
2%磷钨酸或是2%双氧铀。
2. 样品寄送要求
如果是外泌体样品需要干冰寄送，干冰消耗量以每天7kg/d计算，保证足够量的干冰。
