生物扫描电镜-云现场
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部分论文致谢
项目简介
云现场”实验是科学指南针推出的一款黑科技视频网络体验,用户只需要一部电脑或者移动设备,即可在任何时间、任何地点发起或参与测试过程,实现各种信息的实时共享与协作。测试过程实时直连测试仪器屏幕,与测试老师一对一沟通选区拍摄,所见即所得,媲美现场实验。生物扫描电镜主要利用二次电子成像拍摄材料的表面三维形貌情况,拍摄照片为黑白照片;一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等,也可以观察材料在细胞表面的分布情况,广泛应用于检测生物样品、非均相有机材料、无机材料等微米、纳米范围内的表面特征。
生物扫描云现场分为制样和云现场拍摄两部分,两部分单独计费。
一、预约云现场注意事项:
1、抽真空时间含在测试总时长内,即从样品进仓开始计时,常规样品抽真空时间5-10分钟,孔道复杂或较大样品如组织、植物、水凝胶等样品抽真空时间较长,可能在10分钟或以上;
2、测试项目含形貌拍摄,能谱点扫,线扫和面扫,最好在提交订单的时候填写好测试要求,尽量不要测试过程临时增加需求,如需临时增加测试内容最终收费会按实际测试时长计算;
3、云视频测试时长1h起约,不同样品拍摄速度不均一,平均下来,拍摄速度一般3个样/小时(仅供参考),需要拍摄高倍并且需要打能谱的样品一般拍摄速度更慢些,具体请根据实际拍摄要求准确预约时长;
4、最好不要超时,一般情况下,后面会安排其他客户测试,尽量预约足够时间,比如约了 2 小时,最多可测试时间是 2 小时,2 小时后会结束测试,请合理安排时间;如果后面时间 没有其它客户,可以适当延长,费用按实际最终测试总时长计算,多退少补;
5、如临时有事需取消预约,请提前 24 小时联系,可以免费取消,如未提前告知,造成机时损失,按预约时间半价收费;
6、在拍摄过程中遇到问题您有权随时叫停测试,最终测试费用会根据实际测试时长多退少补。
二、可做的测试项目
生物样品前处理、形貌、能谱点扫、能谱线扫、能谱面扫(mapping);可镀金,非磁、弱磁、强磁样品均可拍摄,磁性样品请和项目经理提前说一下,生物类样品磁性的很少。
1、形貌:仪器放大倍数范围是100倍-10W倍,常规样品可以拍摄到1-5W倍,导电性不好或磁性样品大于5W倍可能会不清晰。
2、能谱:SEM能谱一般只能测C(含C)以后的元素,(B元素做不了)如果需要打能谱,需要备注好测试位置以及能谱打哪些元素,样品默认粘在导电胶上。
3、镀金:为了保证拍摄效果,一般导电差或者是强磁性的样品都需要镀金之后进行拍摄。
非磁、磁性(弱磁、强磁)定义:含铁、钴、镍、锰等磁性元素均为磁性样品,吸铁石能吸起来为强磁,吸铁石吸不起来为弱磁。备注:磁性分硬磁和软磁,有些材料对外不表现磁性,但加磁场后容易磁化,受热后磁性增强。
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结果展示
图1. I和II是真菌的菌丝和分生孢子图,III是材料表面大肠杆菌的附着图
样品要求
服务流程:
送样方式:
可接收固定好的细胞/组织样品并附有详细送检要求的送样单
①需要您提供的样品:收集细胞/组织取样(新鲜迅速取材),置于1.5ml离心管内,加入2.5%的戊二醛溶液(固定液加满离心管,使样品完全浸没在固定液中),放置于4℃保存,请不要倒弃固定液,一般固定12h后可寄送(务必采用1.5ml离心管寄送)。
②打印填写完整的预约单、送样单和样品一起寄送。
样品取材及固定常用方法:
细胞类 |
106以上的细胞,用细胞刮刀刮下来,1500-3000转离心,5-10min,收集细胞于1.5ml或2ml离心管,管底肉眼可见2-3粒大米状样品,如果细胞量很多,把细胞团块用细针尖挑成几个小团块,弃上清,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,固定液完全浸没样品,可放置于4°C保存。 |
组织类 |
新鲜取材,取材位置准确,组织大小尽量在1-2mm³,离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中,固定液完全浸没组织,可放置于4°C保存。 |
细菌类 |
吸取OD0.5-0.8的培养物,离心后弃培养基,收集菌体沉淀于管底黄豆大小,可以用PBS洗1-2次,齐上清,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,固定液完全浸没样品,可放置于4°C保存。 |
*固定液的量请参考上图,加至箭头所示位置 |
|
*如样品取材及固定有疑问请及时与指南针工作人员沟通 |
服务周期:
一般为样品接收后的2周左右,如遇法定假期需要顺延,具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认,谢谢!
常见问题
1. 2.5%戊二醛固定液如何配置?
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0) 50ml
蒸馏水加至 100ml
2. 0.2M,pH7.0磷酸缓冲液的配置方法?
A液:Na2HPO4·H2O 31.61g,或者Na2HPO4·7H2O 53.63g,或者Na2HPO4·12H2O 71.64g,加蒸馏水至1000ml
B液:NaH2PO4·H2O 27.6g,或者NaH2PO4·2H2O 31.21g,加蒸馏水至1000ml
0.2M,pH7.0磷酸缓冲液= A液61ml+B液39ml(合起来是100ml)
3. 为什么要加固定液?
固定液是为了保持细胞、组织的固有形态和结构。
4. 扫描电镜前处理制样流程?
新鲜取材后用2.5%戊二醛固定液固定样本,4℃过夜放置,倒掉2.5%戊二醛固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用1%的锇酸溶液固定样品1-2h;小心取出锇酸废液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用梯度浓度(包括30%,50%,70%,80%,90%和95%五种浓度)的乙醇溶液对样品进行脱水处理,每种浓度处理15min,再用100%的乙醇处理两次,每次20 min。用乙醇与醋酸异戊酯的混合液(V/V=1/1)处理样品30min,再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜。临界点干燥。