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生物扫描电镜-云现场
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部分论文致谢
项目简介
云现场”实验是科学指南针推出的一款黑科技视频网络体验，用户只需要一部电脑或者移动设备，即可在任何时间、任何地点发起或参与测试过程，实现各种信息的实时共享与协作。测试过程实时直连测试仪器屏幕，与测试老师一对一沟通选区拍摄，所见即所得，媲美现场实验。生物扫描电镜主要利用二次电子成像拍摄材料的表面三维形貌情况，拍摄照片为黑白照片；一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等，也可以观察材料在细胞表面的分布情况，广泛应用于检测生物样品、非均相有机材料、无机材料等微米、纳米范围内的表面特征。
生物扫描云现场分为制样和云现场拍摄两部分，两部分单独计费。
一、预约云现场注意事项：
1、抽真空时间含在测试总时长内，即从样品进仓开始计时，常规样品抽真空时间5-10分钟，孔道复杂或较大样品如组织、植物、水凝胶等样品抽真空时间较长，可能在10分钟或以上；
2、测试项目含形貌拍摄，能谱点扫，线扫和面扫，最好在提交订单的时候填写好测试要求，尽量不要测试过程临时增加需求，如需临时增加测试内容最终收费会按实际测试时长计算；
3、云视频测试时长1h起约，不同样品拍摄速度不均一，平均下来，拍摄速度一般3个样/小时（仅供参考），需要拍摄高倍并且需要打能谱的样品一般拍摄速度更慢些，具体请根据实际拍摄要求准确预约时长；
4、最好不要超时，一般情况下，后面会安排其他客户测试，尽量预约足够时间，比如约了 2 小时，最多可测试时间是 2 小时，2 小时后会结束测试，请合理安排时间；如果后面时间 没有其它客户，可以适当延长，费用按实际最终测试总时长计算，多退少补；
5、如临时有事需取消预约，请提前 24 小时联系，可以免费取消，如未提前告知，造成机时损失，按预约时间半价收费；
6、在拍摄过程中遇到问题您有权随时叫停测试，最终测试费用会根据实际测试时长多退少补。
二、可做的测试项目
生物样品前处理、形貌、能谱点扫、能谱线扫、能谱面扫（mapping）；可镀金，非磁、弱磁、强磁样品均可拍摄，磁性样品请和项目经理提前说一下，生物类样品磁性的很少。
1、形貌：仪器放大倍数范围是100倍-10W倍，常规样品可以拍摄到1-5W倍，导电性不好或磁性样品大于5W倍可能会不清晰。
2、能谱：SEM能谱一般只能测C（含C）以后的元素，（B元素做不了）如果需要打能谱，需要备注好测试位置以及能谱打哪些元素，样品默认粘在导电胶上。
3、镀金：为了保证拍摄效果，一般导电差或者是强磁性的样品都需要镀金之后进行拍摄。
非磁、磁性（弱磁、强磁）定义：含铁、钴、镍、锰等磁性元素均为磁性样品，吸铁石能吸起来为强磁，吸铁石吸不起来为弱磁。备注：磁性分硬磁和软磁，有些材料对外不表现磁性，但加磁场后容易磁化，受热后磁性增强。
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结果展示
图1. I和II是真菌的菌丝和分生孢子图，III是材料表面大肠杆菌的附着图
样品要求
服务流程：
送样方式：
可接收固定好的细胞/组织样品并附有详细送检要求的送样单
①需要您提供的样品：收集细胞/组织取样（新鲜迅速取材），置于1.5ml离心管内，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4℃保存，请不要倒弃固定液，一般固定12h后可寄送（务必采用1.5ml离心管寄送）。
②打印填写完整的预约单、送样单和样品一起寄送。
样品取材及固定常用方法：
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细胞类 |
106以上的细胞，用细胞刮刀刮下来，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于1.5ml或2ml离心管，管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，可放置于4°C保存。 |
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组织类 |
新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，固定液完全浸没组织，可放置于4°C保存。 |
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细菌类 |
吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用PBS洗1-2次，齐上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，可放置于4°C保存。 |
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*固定液的量请参考上图，加至箭头所示位置 |
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*如样品取材及固定有疑问请及时与指南针工作人员沟通 |
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服务周期：
一般为样品接收后的2周左右，如遇法定假期需要顺延，具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认，谢谢！
常见问题
1. 2.5%戊二醛固定液如何配置？
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.2M磷酸盐缓冲液（pH7.0） 50ml
蒸馏水加至 100ml
2. 0.2M，pH7.0磷酸缓冲液的配置方法？
A液：Na2HPO4·H2O 31.61g，或者Na2HPO4·7H2O 53.63g，或者Na2HPO4·12H2O 71.64g，加蒸馏水至1000ml
B液：NaH2PO4·H2O 27.6g，或者NaH2PO4·2H2O 31.21g，加蒸馏水至1000ml
0.2M，pH7.0磷酸缓冲液= A液61ml+B液39ml（合起来是100ml）
3. 为什么要加固定液？
固定液是为了保持细胞、组织的固有形态和结构。
4. 扫描电镜前处理制样流程？
新鲜取材后用2.5%戊二醛固定液固定样本，4℃过夜放置，倒掉2.5%戊二醛固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用1%的锇酸溶液固定样品1-2h；小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用梯度浓度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五种浓度）的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再用100%的乙醇处理两次，每次20 min。用乙醇与醋酸异戊酯的混合液（V/V=1/1）处理样品30min，再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜。临界点干燥。
