分析型流式细胞仪

流式细胞术是利用流体力学聚焦使细胞一个一个通过激光光路，通过对细胞通过激光时所产生的散射、折射以及激光所激发的荧光光强等信号进行记录，从而对细胞的形态、死活、代谢、周期以及表型等进行分析的技术。

流式细胞仪流程：  

样本制备→激光系统→流动系统→信号处理系统→放大系统→计算机系统

流式细胞术可同时分析单个细胞中多个蛋白、基因表达以及氧化、细胞活性、细胞周期、凋亡和增殖等细胞功能。该技术通过将从单个细胞检测到的信息进行组合来获得具有统计学意义的数据量，从而深入了解异质样品。无论是鉴定细胞亚群，还是研究细胞功能，流式细胞术都有广泛地应用，对免疫功能障碍、造血系统疾病及恶性肿瘤的研究、诊断、治疗和预后评估都起到重要作用。

样本上机前处理方式（以流式周期实验为例）

1、收集细胞：弃去上清，加入1 ml PBS清洗一次，弃上清，再加入1 ml 0.25%胰酶消化细胞，待细胞变圆且有部分细胞悬浮，即加入PBS终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞，使细胞悬浮。细胞悬液转入离心管中，1500 rpm离心5 min收集细胞。

2、PBS洗涤细胞：加入3 ml 4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1500 rpm离心5 min，弃上清。沉淀震荡混匀。

3、固定过夜：沉淀中缓慢加入-20℃预冷的75％乙醇，重悬细胞，4℃过夜。

4、PBS洗涤细胞：加入2 ml PBS混匀后，1500 rpm离心5 min收集细胞，PBS重悬，离心收集细胞。加入100 ul PBS重悬细胞。

5、去除RNA：加入2 μl 浓度为1 mg/ml 的RNaseA（去离子水配制），37℃水浴40 min。

6、荧光标记：加入100 µl浓度为100 µg/ml 的PI染色液（PBS配制），避光染色20 min。

7、上机检测：流式细胞仪使用激发波长488 nm，发射波长585±21 nm进行检测，用flowj软件分析细胞周期以确定细胞周期分布。