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      蛋白印迹实验(Western blot)

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      蛋白印迹实验(Western blot)

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      仪器型号 4
      预约次数 155次
      服务周期 收到样品后平均5.0-15.0日完成

      部分论文致谢

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      项目简介

      一、项目介绍

      Western blot是用抗体检测蛋白的重要方法之一,Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影的形式检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

      服务流程

      二、服务周期

      具体按照实验要求,一般为接受样品后2-3周左右,具体实验周期请预约前与指南针工作人员沟通确认,谢谢!

      三、交付内容

      1. 实验报告;

      2. 内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张。

      (如需定量分析还提供:蛋白定量结果+灰度值统计分析)

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      结果展示

      1、实验操作:取新鲜模型大鼠的肝脏组织,磨碎匀浆处理后提取肝脏内总蛋白,测定磷酸化p38的蛋白表达含量。

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      图1 动物肝脏组织中的P-p38蛋白表达

      2、实验操作:提取经过不同浓度药物处理后的Hela细胞的总蛋白,测定药物对细胞内P-AMPKa、p53、BCL2、Bax蛋白的表达变化影响。

      图2 细胞内P-AMPKa、p53、BCL2、Bax的蛋白表达情况

      样品要求

      一、需要提供

      1. 待测样品(材料或者样品处理后的细胞/蛋白,也可由我们代处理);

      2. 提供待测样品的一抗及其说明书(一抗一般为10ul左右,也可由平台代购);

      3. 其他所涉及的细胞、试剂盒以及生物耗材等平台都可以有偿提供。

      二、送样须知

      1.  细胞样品:细胞量1-2*107个,需要用PBS 清洗后,离心收集细胞沉淀,不能残留PBS,封口膜封口,标记,放入-80°C 冰箱保存,干冰运输寄送。

      2. 组织样品:200mg以上组织,取样品后尽量快速操作,放入液氮中速冻或者立刻存入-80°C 冰箱,样品不能反复冻融,干冰运输寄送。

      3. 蛋白样品:未变性的蛋白需要存入-80°C ,干冰运输寄送;Loading Buffer煮沸的蛋白,需要提供蛋白浓度(浓度需在5μg/μl 以上,200μl样品),冰袋运输寄送。

      4.  植物组织样品:选取新鲜组织,200mg以上组织,尽量避免衰老,病变,发霉的组织;将样品剪成小块放入液氮预冷的螺口离心管中,在液氮中速冻5min,-80度保存,干冰运输寄送。

      5. 血液样品: 样品无潜在性携带病原体和病毒。如果存在病毒的可能性,请灭活处理;

      (1)全血:采集新鲜血液,建议全血样品用全血样品RNA提取试剂盒抽提RNA,或者新鲜血液分离白细胞;处理后的样本放入干冰或者﹣80℃冰箱保存,干冰运输寄送。

      (2)血浆:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,4℃ 4000rpm离心5分钟,上层为血浆样本,按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输寄送。

      (3)血清:用非抗凝管收集血样,静置分离上层血清,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输寄送。

      6. 菌体:收集菌体到1.5ml的离心管内,离心去上清,用1*pbs洗涤三次,液氮速冻5min后,-80度保存。

      常见问题

      1. 如何选择目的蛋白的抗体?

      蛋白印迹实验和流式细胞术都是使用抗体来检测细胞内靶标物质,但是流式可使用荧光来检测和分析每个细胞的蛋白表达。

      如开展多靶标分析、细胞亚群分析等建议使用流式细胞术进行研究。

       

       

      2. 如何选择蛋白印迹检测或流式细胞术检测?

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