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      蛋白印迹实验(Western blot)

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      蛋白印迹实验(Western blot)

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      仪器型号 4
      预约次数 120次
      服务周期 5.0-15.0日完成

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      项目简介

             Western blot是用抗体检测蛋白的重要方法之一,Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影的形式检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

      服务流程

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      结果展示

      1、实验操作:取新鲜模型大鼠的肝脏组织,磨碎匀浆处理后提取肝脏内总蛋白,测定磷酸化p38的蛋白表达含量。

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      图1 动物肝脏组织中的P-p38蛋白表达

      2、实验操作:提取经过不同浓度药物处理后的Hela细胞的总蛋白,测定药物对细胞内P-AMPKa、p53、BCL2、Bax蛋白的表达变化影响。

      图2 细胞内P-AMPKa、p53、BCL2、Bax的蛋白表达情况

      样品要求

      需要提供

      1. 待测样品(材料或者样品处理后的细胞/蛋白,也可由我们代处理)。

      2. 提供待测样品的一抗及其说明书(一抗一般为10ul左右,也可由平台代购)。

      3. 其他所涉及的细胞、试剂盒以及生物耗材等平台都可以有偿提供。

      服务周期:

      具体按照实验要求,一般为接受样品后2-3周左右,具体实验周期请预约前与指南针工作人员沟通确认,谢谢!

      交付内容:

      1.实验报告

      2.内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张

      如需定量分析还提供

      1.蛋白定量结果

      2.灰度值统计分析

      常见问题

      1. 预约前需要您确认的信息?

      1.明确样品中是否存在检测的目的蛋白?并且在哪个时期存在?是否需要外源性刺激其表达?(这些问题决定了前处理的方法和时间)

      2.目的蛋白的是否容易出现降解?分子量大小?是否存在于细胞或组织特定部位需要特殊方法提取?(这些问题涉及目的蛋白提取方案及是否可以寄送)

      3.目的蛋白含量是否达到wb的检测限?(目前认为Western Blot的有效检测下限为0.1-1ng,含量高有助于条带显影)。

      2. 如何选择目的蛋白的抗体?

      1.明确目的蛋白名称或者目的基因名称、明确样品种属来源;

      2.在各个抗体或试剂公司网站进行搜索;

      3.选择抗体的反应性(样品是什么种属来源就选择什么物种);

      4.选择抗体适合的用途(如果抗体需要既用于wb又用于后续做免疫组化等实验,要选择都适用的抗体)。

      3. 如何选择蛋白印迹检测或流式细胞术检测?

      蛋白印迹实验和流式细胞术都是使用抗体来检测细胞内靶标物质,但是流式可使用荧光来检测和分析每个细胞的蛋白表达。

      如开展多靶标分析、细胞亚群分析等建议使用流式细胞术进行研究。

       

       

      4. 小鼠各组织内参蛋白如何选择?

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